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中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能影响 　 作者：刘翠艳, 赵宏坤，韩春杨 毕业论文 【关键词】; 中药免疫调节剂;,小鼠;,脾淋巴细胞转化;,含药血清 毕业论文 　　[摘 要]; 目的: 探讨中药免疫调节剂对正常小鼠及环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。方法: 以Cy诱导建立免疫抑制小鼠模型, 给正常小鼠和免疫抑制小鼠饮服中药及生理盐水, 采用MTT法检测淋巴细胞的增殖反应情况。结果: 试验各组小鼠脾细胞在48 h培养时间内淋巴细胞转化率与各组含药血清加入到正常小鼠脾细胞反应体系中, 在相同培养时间内的淋巴细胞转化率呈高度正相关。表现为: 在机体正常条件下, 两个中药组与正常组之间差异无统计学意义（Pgt;0.05）, 但均高于Cy组（Plt;0.05）; 在免疫抑制条件下, 两个中药组明显高于正常对照组和Cy组（Plt;0.05）, 且中药免疫调节剂组优于玉屏风组（Plt;0.05）; 另外, 50 mL/L浓度的含药血清优于100 mL/L浓度的含药血清（Plt;0.05）。结论: 该中药免疫调节剂能显著促进免疫抑制小鼠淋巴细胞的转化, 而对正常小鼠作用不明显。 毕业论文 　　[关键词]中药免疫调节剂; 小鼠; 脾淋巴细胞转化; 含药血清 毕业论文 　　目前, 国内外在中药免疫调节剂的研究开发方面, 研究单味药和其所含的单体成分（最多的是多糖, 其次为有机酸、 甙类、 生物碱、 黄酮等）占多数[1-3], 复方研究较少且不深入。但是, 正是复方制剂的复杂成分才获得了单味药和单体成分所不具备的药效整体性和协同互补作用, 使疗效增强、 毒副作用减少, 在实际应用中更具优势。为此, 我们根据中药方剂的组成原则, 结合现代药理学研究成果, 以具有免疫调节作用的经典方剂“玉屏风散”为对照, 通过体外筛选、 毒性测定, 最后由黄芪、 茯苓、 白术、 甘草、 防风、 桔梗6味药组成了复方中药免疫调节剂, 并用MTT法探讨了该中药免疫调节剂对正常小鼠及Cy所致免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。 毕业论文 　　1; 材料和方法 毕业论文 　　1.1; 材料; RPMI1640培养基（Gibco公司）; MTT（四甲基偶氮唑盐, Amresco公司）, 以pH7.2的 RPMI1640培养液制成5 g/L溶液; PHA（Sigma公司）, 以pH7.2的RPMI1640培养液制成200 mg/L溶液; 小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司, 批号: 051215); 环磷酰胺（Cy, 上海华联制药有限公司, 批号: 050306）; 中药免疫调节剂（ZY）: 黄芪、 茯苓、 白术、 防风、 甘草、 桔梗组成复方免疫调节剂, 采用自动循环煎药机提取浓缩, 按照生药量计算使终浓度为300 g/L, 购自山东泰安工商联医药商行。玉屏风散（YPF）: 选自《中国兽药典》; MC0175型CO2恒温培养箱（日本SANYO）; COIC3168型倒置相差显微镜（重庆光学仪器厂）; 2010型BLOCELLHT系列酶标仪（郑州博塞生物工程有限责任公司）; SWCJIF型超净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司）; 96孔细胞培养板（Becton Dickinson, USA）; 6周龄昆明种小鼠72只, 质量18～20 g, 雌雄各半, 购自山东米歇尔生物制品有限公司动物饲养中心, 实验动物生产许可证号: 毕业论文 　　1.2; 方法 毕业论文 　　1.2.1; 动物分组及处理方法; 将72只小鼠随机分为6组: 第1组为正常对照组,; 定量给水给料; 第2组为Cy对照组, 于试验的第4天注射Cy, 按50 mg/kg, 连续7 d; 第3、 4组为中药免疫调节剂组（简称中药组）, 小鼠给药方式采取饮水给药, 1次/d, 按体表面积折算动物的等效剂量的2倍给药, 12 mL/(d#12539;鼠), 连续15 d; 第5、 6组为玉屏风散组, 12 mL/(d#12539;鼠)。其中第3、 5组只给药不注射Cy, 第4、 6组给药并于第4天饮完药1 h后注射Cy（剂量、 疗程同第2组）。 毕业论文 　　1.2.2; 含药血清的制备; 采用摘眼球法在最后一次给药1 h后（采血前先禁食12 h）采血。血液置于1 mL离心管内, 静置2 h, 3000 r/min离心20 min, 无菌分离血清, 56℃水浴30 min灭活后, 置4℃冰箱保存, 24 h内使用。 毕业论文 　　1.2.3; 小鼠脾淋巴细胞的制备; 各组小鼠无菌取脾脏, 在冷Hanks液中将脾组织制备成单个脾细胞悬液, 1500 r/min离心10 min, 弃上清液, 加入6 mL 8.3 mL/L Tris