中药黄芪对糖尿病大鼠CYP450 2E1活性影响.docVIP

中药黄芪对糖尿病大鼠CYP450 2E1活性影响 　【摘要】 　　目的用探针药物研究黄芪对大鼠CYP450活性的影响。方法采用四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠，正常大鼠为对照组，给予黄芪水提物诱导，通过HPLC检测探针药物的代谢率来评价各组CYP450 2E1活性。结果给药组动物血液中的氯唑沙宗的含量与模型组和空白组的含量无显著区别（Pgt;0.05）。结论黄芪对大鼠CYP2E1活性无明显影响。 【关键词】 CYP450 氯唑沙宗 探针药 黄芪 　　Abstract:ObjectiveTo evaluate the effect of Huangqi on CYP2E1 activity of diabetic rats with probe drug.MethodsDiabetic rat model was induced by alloxan.The rats were given the aqueous extracts of Huangqi orally for six days.The activity of CYP2E1was evaluated by measuring chlorzoxazone, a drug probe for CYP2E1,and its metabolites were detected by HPLC.ResultsHuangqi had no effect on plasma concentration of cholrzoxazone,there was no significant difference when compared with control group and diabetic-model group(P＞0.05).ConclusionHuangqi has no effect on CYP2E1 activity. 　　Key words:CYP450; Chlorzoxazone; Probe drug; Huangqi 　　黄芪作为一种常用中药，不论是组方配伍汤剂，还是提取物的注射剂，均已经在临床上广泛应用于糖尿病（中医“消渴”）的治疗［1］，但黄芪对CYP450酶系的影响尚属空白，因此本实验研究了黄芪对细胞色素P450的影响。细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）酶系一般简称药酶，在外源性物质和内源性物质的代谢中起着极其重要的作用［2］。本实验用探针药物法，通过体内实验来评价黄芪对CYP 2E1活性的影响，CYP 2E1底物为氯唑沙宗(chlor zoxazone)［3,4］。 　　1 器材与方法 　　1.1 药物黄芪（购自河南省药材公司，经河南中医学院中药鉴定学科鉴定为正品），粉碎并准确称量，经水煎浓缩，使其浓度相当于1 g/ml的原药萃取液。冷藏备用。 　　1.2 试剂四氧嘧啶、氯唑沙宗为Sigma公司试剂，氯仿、甲酸和2-丙醇为分析纯试剂，乙腈为色谱纯试剂。 　　1.3 仪器高效液相色谱（美国Waters公司）；Millennium2010色谱工作站。 　　1.4 动物SD大鼠，雄性（230±20）g，二级，购自郑州大学医学院实验动物中心。 　　1.5 方法 　　1.5.1 模型制作大鼠随机分为两组，实验组在空腹12 h后按200 mg/kg体重腹腔注射2％四氧嘧啶，正常对照组大鼠腹腔注射相同体积的生理盐水。造模期间检测体重、血糖（强生血糖仪）。于第7天，禁食12 h，眼内眦静脉丛取血测血糖。空腹血糖升高，体重下降，表明已制备2型糖尿病模型。因四氧嘧啶对肝脏可能有潜在损伤，故监测谷丙转氨酶（GPT）。将已制备成2型糖尿病模型的大鼠（且GPT无明显改变者）随机分为模型组、给药组，每组5只。 　　　1.5.2 给药方法给药组每天清晨空腹灌胃给予黄芪提取液1次，0.3 ml/100 g，空白对照组、模型组给予相同体积的生理盐水，诱导时间为6 d。黄芪诱导后的第6天在乙醚麻醉下，于大鼠的右侧颈静脉处做插管手术，次日给予探针药物氯唑沙宗。氯唑沙宗按20 mg/kg的剂量加入少量聚山梨酯-80研磨，再加入生理盐水制成乳浊液静脉注入，并于给药后的0.17，0.5，0.83，1.17，1.5 h由插管处取出约0.25 ml血液，立即以4 000 r/min离心5 min，准确取出100 μl血清，加入内标，混匀，再加入650 μl氯仿，混悬振荡2 min，离心（5000 r/min，5 min），取有机相氯仿500 μl，氮气下干燥，加入流动相100 μl溶解，取80 μl进样。 　　1.6 数据处理和统计分析AUC0～8 h用梯形法计算，Cmax和tmax可以从药-时曲线直接读出。Ke和t1/2运用药代动力学专用软件PAS 2.0计算。给药前后药代