高中生物-第六章-蛋白质和DNA技术章末整合课件-中图版选修1.pptVIP

* 章 末 整 合 (1)将生物组织进行机械破碎，获得细胞。 (2)选用合适的方法如研磨法、超声波法、酶解法破碎细胞，使各种蛋白质释放出来。 (3)根据蛋白质的不同特性，选择不同的溶剂进行抽提。 ①酸性蛋白质可用稀碱性溶液抽提。 ②水溶性蛋白质可用中性缓冲液(透析液)抽提。 ③脂溶性蛋白质可用有机溶剂抽提。 (4)抽提得到的粗提取物经离心去除固体杂质。 (5)再用物理学和化学的方法处理，即可得到蛋白质的粗制品。 蛋白质的提取 PCR即聚合酶链式反应，它是在体外模拟的细胞内DNA复制过程。因此解答这类题目需掌握DNA的结构、DNA的复制等相关知识，现归纳如下： (1)DNA分子的结构 ①DNA分子的基本组成单位为脱氧核苷酸，共4种，其差别是由碱基种类决定的； ②脱氧核苷酸以磷酸二酯键形式聚合成多脱氧核苷酸链； ③两条脱氧核苷酸长链反向平行盘旋成双螺旋结构，其主链是由排列在外侧且以磷酸二酯键交替连接的脱氧核糖和磷酸构成； ④两条长链的碱基之间的氢键连接成碱基对，碱基对的形成遵循碱基互补配对原则。 DNA分子的结构与复制 (2)DNA分子的复制 ①解旋：需要细胞提供能量，在解旋酶的作用下，两条螺旋的双链解开。 ②合成子链：以解开的每一段母链为模板，在DNA聚合酶等酶的作用下，利用游离的4种脱氧核苷酸为原料，按照碱基互补配对原则，合成与母链互补的子链。 ③形成子代DNA分子：延伸子链，母子链盘绕成双螺旋结构。结果，一个DNA分子形成两个完全相同的子代DNA分子。 ④特点：a.边解旋边复制。b.复制方式：半保留复制。 (3)结构与复制的关系 ①DNA分子独特的双螺旋结构为复制提供精确模板。 ②通过碱基互补配对原则保证了复制准确进行。 简析　 (1)透析法 ①原理：蛋白质水溶液具有亲水胶体溶液性质，不能透过半透膜。 ②目的：去除小分子化合物杂质，如无机盐、单糖、双糖、氨基酸等。 ③常用的半透膜：肠衣、玻璃纸。 透析、离心、电泳与凝胶色谱法 ④步骤：将待纯化的蛋白质溶液装入透析袋内，再把透析袋放入透析液中即可。 (2)离心法 ①原理：在离心力的作用下，分子大小、密度不同的分子沉降速度不同，从而被分离。 ②目的：使分子大小、密度不同的不同种类的蛋白质彼此分离。 (3)电泳 ①概念：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象。 ②原理：不同的物质所带电荷不同，颗粒的大小、形状不同，因此，在电场中的泳动速度不同。 ③影响泳动的因素：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少；此外还有电场强度、溶液的pH等因素。 ④泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。 ⑤支持物：滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等。 (4)凝胶色谱法 凝胶色谱法也称作分配色谱法，是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。 下列关于蛋白质的纯化方法的叙述，错误的是 (　　)。 A．纯化主要是根据蛋白质以及蛋白质与其他物质之间的 理化性质的差异进行的 B．透析法可去除小分子化合物杂质，原理是不同分子所 携带净电荷不同 C．通过控制离心速率，可使分子大小、密度不同的蛋白 质沉降分层，从而分离不同的蛋白质 D．不同的物质在同一电场中的泳动速度不同，因此可用 电泳法分离蛋白质 解析　透析法分离纯化蛋白质是因为蛋白质的分子大，不能透过半透膜。 答案　B 【典例1】 简析　PCR与DNA复制的异同点 PCR技术与细胞内DNA复制 项目 DNA复制 PCR扩增 不 同 点 场所 细胞内 细胞外 能量 ATP提供能量 不需ATP提供能量 酶 解旋酶、DNA聚合酶 耐热的TaqDNA 聚合酶 是否有 转录 伴有转录、产生引物 无转录、需加入 两种引物 特点 边解旋边复制， 半保留复制 体外迅速扩增 循环次数 受生物体自身控制 30多次 缓冲液 不需要 需要人为控制 设备 无 需要严格控制温度 变化的温控设备 项目 DNA复制 PCR扩增 相 同 点 原料 四种脱氧核苷酸 原则 严格遵循碱基互补配对原则 模板 DNA为模板 引物 都需要与模板相结合的引物 方向 都是从5′端到3′端 (1)PCR反应中的复性过程中，会不会出现原来解旋开的两个DNA模板链重新结合的情况？试分析原因。 ________________________________________________。 (2)PCR反应中，如果以引物为标识，共有几种DNA分子产生？请用图解表示。 答案　(1)当DNA模板双链在95 ℃左右解开后，温度又缓慢降至55 ℃左右复性时，也会出现原来解开的模板链重新结合的情况，但一般不考虑。原因包括：①模板DNA比引物长得多、复杂得