人白介素24基因诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡实验探究.docVIP

人白介素24基因诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡实验探究 　【关键词】 人白细胞介素24；Ca,Ski细胞；乳头状瘤病毒,人；,E6基因；蛋白质P53；细胞凋亡 　　Apoptosis induction of human cervical cancer Ca Ski cells by hIL24 gene 　　【Abstract】 AIM: To investigate the hIL24 gene inducing apoptosis of human cervical cancer Ca Ski cells and its possible mechanism. METHODS: Ca Ski cells were transfected with hIL24 eukaryotic expression vector pcDNA3.1(+)hIL24 by lipofectamine2000. The effect of hIL24 on the transcription of HPV E6 gene was analyzed by RTPCR. The effect of hIL24 on P53 protein was analyzed by Western Blot. Apoptosis of Ca Ski cells induced by hIL24 gene was analyzed by FACS. RESULTS: Transcription level of HPV E6 gene decreased significantly, the amount of P53 protein increased significantly and the apoptosis rate of Ca Ski cells increased significantly after hIL24 transfection. CONCLUSION: HIL24 gene can inhibit the transcription of HPV E6 gene, recover the activity of P53 protein, then induce the apoptosis of Ca Ski cells. 　　【Keywords】 human interleukin24; Ca Ski cells; papillomavirus, human; E6 genes; protein P53 ; apoptosis 　　【摘要】 目的： 研究人白介素24(hIL24)在体外诱导宫颈癌Ca Ski细胞凋亡及其作用机制. 方法： ① 以脂质体包裹重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)hIL24转染Ca Ski细胞； ② 利用RTPCR技术检测处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平变化； ③ Western Blot分析处理后Ca Ski细胞中抑癌蛋白P53水平的变化； ④ 流式细胞仪分析处理后的Ca Ski细胞凋亡情况. 结果： 处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平下降，抑癌蛋白P53水平增加，细胞凋亡率升高. 结论： 真核表达载体介导的hIL24基因体外转染宫颈癌Ca Ski细胞后，能抑制Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的表达，使抑癌蛋白P53恢复活性，促使宫颈癌Ca Ski细胞凋亡. 　　【关键词】 人白细胞介素24；Ca Ski细胞；乳头状瘤病毒，人； E6基因；蛋白质P53；细胞凋亡 　　0引言 　　人白介素24（hIL24）是IL10细胞因子家族中的新成员［1］. hIL24对肿瘤细胞有特异性的抑制和杀伤作用，如诱导凋亡、抑制生长和抑制肿瘤血管生长，而对正常细胞没有影响,其显著的抗肿瘤特性使之成为肿瘤治疗的新热点［2-3］. 子宫颈癌是危害广大妇女健康最常见的恶性肿瘤之一，仅次于乳腺癌而位居第二. 近年来，年轻妇女中宫颈癌的发病率呈明显上升的趋势［4］，宫颈癌越来越引起人们广泛的关注. 本实验我们采用hIL24基因的真核表达载体转染宫颈癌Ca Ski细胞，以探讨hIL24对宫颈癌的治疗效果. 　　1材料和方法 　　1.1材料重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)hIL24，空质粒pcDNA3.1(+)，表达绿色荧光蛋白（GFP）的质粒pEGFPC1与人宫颈癌Ca Ski细胞株均为本室保存. Trizol、逆转录试剂盒和DAB显色试剂盒购自北京鼎国公司；所有的抗体购自Santa cruz公司；脂质体lipofectamine2000购自invitrogen公司；寡核苷酸引物合成由上海生工完成，质粒抽提试剂盒购自QIAGEN公司，AnnexinV/FITC染色试剂盒购自