伤寒沙门菌基因组DNA芯片基因表达谱分析技术建立及优化.docVIP

伤寒沙门菌基因组DNA芯片基因表达谱分析技术建立及优化 　作者：生秀梅， 黄新祥, 徐顺高， 张海方， 许化溪 【摘要】 　　目的： 建立和优化基于伤寒沙门菌全基因组DNA芯片的基因表达谱分析技术。方法： 提取伤寒沙门菌野生z66阳性菌株总RNA，以6，9核苷酸随机引物（N6、N9）和（或）基因组特异引物（GDP）反转录合成cDNA，用荧光素Cy5或Cy3直接掺入标记后，与包括伤寒沙门菌4201个蛋白编码基因的伤寒沙门菌全基因组芯片杂交，用芯片扫描仪扫描后获得表达谱分析结果，经过数据标准化处理后进行分析。结果： 采用N9+GDP混合引物，直接掺入法标记时，既能获得较好标记效果，又能节约试剂成本，同时可减少繁琐步骤所引起的不必要失误。结论： 建立的基于伤寒沙门菌基因组DNA芯片的基因表达谱分析技术，为细菌的基因表达调控及功能基因组学研究提供了平台。 【关键词】 伤寒沙门菌； 基因组； DNA 芯片； 基因表达谱 　　［Abstract］Objective: To develop and optimize the Salmonella enterica serovar Typhi genomic DNA microarraybased gene expression profiling. Methods： Total RNA of the z66positive