反相高效液相色谱法测定薄芝菌丝体中 3种核苷类成分含量.docVIP

反相高效液相色谱法测定薄芝菌丝体中 3种核苷类成分含量 　【摘要】 目的建立高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法同时测定薄芝菌丝体中3种核苷类成分（尿嘧啶、尿苷、腺苷）的含量。方法采用RP-HPLC法测定，Alltima C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)为色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱（0～15 min，乙腈-水比例为5∶995，15～30 min，比例为15∶985），流速1.0 ml·min-1，检测波长262 nm。结果3个核苷的线性范围分别为，尿嘧啶：0.140 2 ～0.700 8 μg, (r=0.999 8,n=5)；尿苷：0.103 2～0.515 6μg(r=0.999 7,n=5)；腺苷：0.124 5～0.622 4 μg(r=0.999 4,n=5)。平均加样回收率分别为：尿嘧啶99.44%，尿苷100.08%，腺苷99.96%。结论该方法灵敏度高、操作简便、重复性好、效率高,为全面评价薄芝菌丝体质量提供一个可靠方法。 【关键词】 反相高效液相色谱法； 薄芝菌丝体； 梯度洗脱； 核苷类成分 Abstract：ObjectiveTo determine the contents of nucleosides in Bo Zhi Mycelium(uracil, uridine, adenosine) by HPLC with gradient elution.MethodsUracil, uridine, adenosine were dealt with by HPLC with Alltima- C18 analytical column (5μm,250 mm×4.6 mm). The mobile plase consisted of acetonitrile-water,gradient elution(0～15 min,CH3CN-water 5:995,15～30 min, CH3CN-water 15:985). The flow rate was 1.0 ml·min-1.The UV detection was set at 260 nm.ResultsThe linear ranges of uracil, uridine and adenosine were 0.140 2 ～0.700 8 μg (r=0.999 8,n=5); 0.103 2～0.515 6 μg (r=0.999 7,n=5); 0.124 5～0.622 4μg (r=0.999 4,n=5) respectively.The average recovery was 99.44%; 100.08% and 99.96% respectively.ConclusionThis method is simple,reliable,efficient,and provides a reference standard for the quality control of Bo Zhi Mycelium. Key words：RH-HPLC; Bo Zhi Mycelium; Nucleosides; Gradient elution 薄芝菌丝体为多孔菌科灵芝属薄盖灵芝Ganoderma capense(Lloyd.)Tend.菌经深层培养所得的菌丝体。市场上有用薄盖灵芝菌丝体为原料制成的薄芝片和注射液，临床上主要用于硬皮病、皮肌炎、多发性肌炎、红斑狼疮、斑秃、银屑病、进行性肌营养不良、妇女更年期综合征、神经衰弱等病症治疗。对所含有效成分的含量测定研究，文献报道虽有尿苷作为原料菌丝体含量测定报道［1］，但未见多种成分的测定报道，鉴于中药多组份多靶点的作用特点，本实验采用HPLC法对其原料菌丝体所含功效成分腺苷、尿嘧啶、尿苷3种成分在同一条件下进行了含量测定研究。 1 仪器与试药 1.1 仪器高效液相色谱仪（美国S﹒S﹒I Series Ⅲ 泵，检测器 美国S﹒S﹒I Model 500）；Alltima C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm)；千谱数据处理系统。 1.2 试药腺苷对照品（美国 Sigma公司，含量99%，批号 1093813）；尿嘧啶对照品（美国 Sigma公司，含量99%，批号1083813）；尿苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号887-200001）；溶剂均为分析纯和色谱纯，超纯水。 1.3 药材薄芝菌丝体由南京中医药大学生药鉴定教研室刘训红教授鉴定。 2 方法与结果 2.1 溶液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取80℃干燥至恒重的对照品：尿嘧啶4.38 mg，尿苷3.23 mg，腺苷3.89 mg，称定，分别置25