反相高效液相色谱负峰测定法探究以及酮类测定.docVIP

反相高效液相色谱负峰测定法探究以及酮类测定 　 作者：王培 郭治安 陈海旭 王丽琴 【摘要】 　　研究了反相液相色谱中负峰现象及产生的原理，应用计量置换作用原理解释了样品在色谱柱中的计量置换保留行为；应用负峰法测试了甲基脂肪酮各组分的含量。本研究采用Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)， 流动相为V（甲醇）∶V(水, 含0.01 mmol/L磺基水杨酸)=60∶40， 紫外检测器(λsig=310 nm， λref=275 nm)。 本方法简便，线性相关系数r均大于0.9993； 甲基酮的定量下限为0.041 μg； 相对标准偏差为0.52%～0.80%。 【关键词】 反相高效液相色谱； 负峰法； 计量置换； 甲基酮 　　Abstract The phenomenon of negative peaks ultraviolet detection (UV) was reported and the principle was explained. In liquid chromatography, solute molecules in the mobile phase undergo many successive adsorptions and desorptions. It was proved that there was a relationship called stoichiometric displacement. The stoichiometric displacement retention behavior of samples in the column was explained using the theory. Based on the theory, the content of each component in the mixed ketones was detected. From the study, UV detector can be used to detect the sample without UV absorbance. As the result of the study, liquid chromatography separation was performed on Agilent C18 column with methanolwater (60∶40, V/V) and sulfosalicyclic acid concentration of 0.01 mmol/L as mobile phase and with UV detection (λsig=310 nm， λref=275 nm ). The method was simple and the correlation coefficients were above 0.9993. The limit of quantitative detection was 0.041 μg for methyl ketones and their relative standard deviations were between 0.5% and 0.8%. 　　Keywords Reversed phase high performance liquid chromatography; Negative peak; Stoichiometric displacement; Methyl ketones　 　　1 引 言 反相液相色谱中负峰测定法是一种间接光度检测方法，广泛应用于离子色谱和毛细管电泳中，检测对象基本是离子型化合物[1～5]，对于其作用机理也有相关解释[3～5]。而由于缺乏合理的理论解释，间接光度反相液相色谱未得到很好的应用。色谱计量置换机理[6]即一个溶质分子被吸附剂吸附的同时，必伴随着一定计量数目的溶剂分子离开溶质分子与吸附剂的界面而返回到溶液中。这个理论很好地解释了间接光度反相液相色谱测定中出现的负峰现象。若应用紫外检测器，样品分子是无紫外吸收或弱紫外吸收的分子，流动相含有紫外吸收分子，则在色谱分离过程中样品分子与固定相上吸附的紫外吸收分子发生置换使其返回到流动相中，相应谱带的紫外吸收分子浓度降低，检测器检测出负峰（即弱吸收峰）信号。因此，负峰法使紫外检测器可应用于无紫外吸收或弱紫外吸收的物质的分析测定。醛酮分子在紫外区有很微弱的吸收，用紫外检测器一般很难直接测定。通常，醛酮的测定需利用氨化还原反应在其还原端接上有紫外吸收的基团，例如2,4二硝基苯肼衍生测定法[7,8]。若能借鉴色谱中的计量置换机理，采用间接光度技术直接测定醛酮，则可消除衍生化操作