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外周血CK20 mRNA表达及大肠癌诊断、分期及预后探究
外周血CK20 mRNA表达及大肠癌诊断、分期及预后探究
【关键词】 大肠癌 角蛋白 逆转录聚合酶链式反应
0 引言
我们利用RTPCR技术检测了126例大肠癌患者外周血单个核细胞CK20 mRNA的表达情况, 研究 CK20 mRNA的表达在大肠癌中的临床意义。 论文代写
1 资料与 方法
1.1 研究对象
1.1.1 大肠癌组 经手术后病理证实的大肠癌患者126例,男75例,女51例,年龄38~73岁,平均57.4岁;按Dukes分期:A期23例、B期34例、C期44例、D期25例。术前采集外周血。
1.1.2 正常对照组 健康志愿者25例,男17例,女8例,年龄29~58岁,平均46.5岁。
1.1.3 细胞株组 ①HT29细胞株(结肠癌细胞株);②H740细胞株(肝癌细胞株);③2HTB133(乳腺癌细胞株);④TPG5(肺癌细胞株);⑤K562细胞株(红白细胞病细胞株);⑥SGC7901(胃癌细胞株),常规细胞培养。
1.1.4 其他癌症组 胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、食管癌各10例。
1.2 方法
1.2.1 样品的采集和保存
(1)血标本的采集 采取大肠癌患者及正常献血员外周静脉血10ml,放入20u/ml肝素处理的防凝试管内,分离出单个核细胞,放入80℃冰箱保存备测。
(2)实体瘤标本的来源 大肠癌组织及其他癌症取自大肠癌和其他癌症病人手术后癌组织。标本30min内送实验室,新鲜提取总RNA;不能保证30min内制备的样品,在留取后放80℃冰箱保存备测。
1.2.2 CK20 mRNA的测定 用RTPCR法。总RNA的提取:以酸性硫氰酸肌苯酚氯仿一步法提出总RNA,80℃保存待测。逆转录(RT)反应: 于DEPC处理的Eppendorf管中,加入总RNA,MMLV,随机引物,逆转录反应体系,快速离心混匀。37℃1h,95℃10min灭活MMLV。快速离心使蒸气沉于管底。PCR反应: 于0.5ml Eppendorf管中,加入RT反应产物,PCR 反应体系,CK20上游引物(5CAGACACACGGTGAACTATGG3’)1μl,CK20下游引物(5CAGACACACGGTGAACTATGG3’)1μl,扩增片段长度为370bp;βactin上游引物(5GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3’)1μl,βactin下游引物(5CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC3’)1μl,扩增片段长度为500bp。95℃ 5min,离心使蒸气沉于管底。加入TaqDNA聚合酶,快速离心混匀。循环条件:94℃ 1min,58℃ 1min, 72℃ 1min。循环35次,末次延长7min。电泳鉴定,观察目的基因,实验中仅出现一条500bp βactin带,为CK20 mRNA阴性;同时出现370bp带,为CK20 mRNA阳性。
1.3 随访 对18例Dukes A患者、23例Dukes B患者、28例Dukes C患者进行了随访, 内容 主要观察远处转移情况。
1.4 统计学处理 用POMS2.00版医学统计软件包进行数据处理,用χ2检验。 论文代写
2 结果 毕业论文
2.1 CK20 mRNA的表达情况
细胞株:仅HT29、SGC7901细胞株阳性,其余细胞株均阴性;25例健康志愿者:外周血CK20 mRNA均为阴性;126例大肠癌中69例阳性,阳性率54.8%;其他癌症组:仅胃癌组织阳性,其余癌组织均阴性。
2.2 Dukes分期126例大肠癌患者外周血CK20的表达情况
各分期CK20 mRNA表达的阳性率分别为:Dukes A期21.7%,B期32.4%,C期63.6%,D 期:88%。各分期比较:A期与B期比较χ2=1.948,Plt;0.05;与C 期比较χ2=2.346,Plt;0.01;与D期比较χ2=10.605,Plt;0.01。B期与C期比较χ2=2.806,Plt;0.01;与D 期比较χ2=7.421,Plt;0.01; C 期与D期比较χ2=4.343,Plt;0.01。 论文代写
2.3 随访情况
Dukes C期的患者在术前和术后的 治疗 差异极大,完成随访(12~52月)并且可以评价的患者20例,11例CK20 mRNA阳性的患者中有6例(54.5%)发生了远处转移,而9例CK20 mRNA阴性的患者中有3例(33.3%)发生了远处转移,两者比较χ2=1.421,Pgt;0.05,出现这种结果的原因可能是由于Duk
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