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多重 PCR 检测耐万古霉素肠球菌基因型探究 　【摘要】 目的：研究 7 株耐万古霉素肠球菌（VRE）耐药表型和基因型，指导临床合理使用抗生素。方法：采用琼脂筛选法筛选 VRE，并分别用 E test 、多重 PCR 和限制性长度多态性分析方法检测万古霉素耐药或中介肠球菌株的表型和基因型。结果：7 株对万古霉素耐药或中介的肠球菌株，2 株为 van A 型，3 株为 van C1 型，1 株为 van C 2/3 型，1 株基因型未明，基因型和表型一致。结论：7 株 VRE 中有 2 株 van A 型，提示实验室准确检测 VRE 对临床上合理使用抗生素和 预防 VRE 的流行是非常重要的。 【关键词】 万古霉素；耐药性；肠球菌；表型；基因型 〔Abstract〕Objective Vancomycin resistance phenotypes and genotypes were studied for know the distribution of 7 vancomycin resistant enterococci (VRE) in Shenzhen Second People’s Hospital and instruct rational application of antibiotics clinically. Methods Screening VRE with agar screen, and detecting the phenotypes and genotypes of vancomycin resistant or intermediate enterococci with E test and multiplex PCR-restriction fragment length polymorphism. Results 7 strains were vancomycin-resistant or intermediate to enterococci, vanA for 2 strains were detected, vanC1 for 3 strains were detected, vanC2/3 for 1 strain was detected, 1 strain was unknown. Their phenotypes confirmed to the genotypes. Conclusion 2 strains vanA have found. It is important for clinical laboratory to detect VRE with right methods to instruct rational application of antibiotics clinically and prevent VRE prevalence. 〔Key Words〕 Vancomycin; Resistance; Enterococcus; Phenotypes; Genotypes 近年来万古霉素耐药肠球菌（Vancomycin-resistant enterococci, VRE）感染不断上升，美国 2004 年对 670 家医院的耐药监测显示 VRE 位于医院耐药菌第 2 位[1]。其耐药机制为细菌细胞壁结构改变，万古霉素与之亲合力下降，基因分型至少有vanA、vanB、vanC、vanD 和 vanE 等型别。肠球菌可引起菌血症、心内膜炎以及泌尿系、腹腔和伤口感染。本实验采用多重 PCR 技术对肠球菌耐万古霉素基因进行了检测，以满足临床快速、特异的检测耐万古霉素基因分布及流行病学研究。 1 材料和方法 1.1 菌株来源 标准菌株：ATCC29212（粪肠球菌）；参考菌株：vanA、vanB、vanC1 和 vanC2 等 4 株 VRE 菌株均由上海第二医科大学附属瑞金医院惠赠。 1.2 抗生素纸片 万古霉素、替考拉宁药敏纸片和 Etest 试纸条分别购自 Oxoid 和 AB Biodisk 公司。 1.3 主要试剂 GPI 鉴定卡购自生物梅里埃公司；M-H 琼脂、脑心浸液培养基购自 Oxoid 公司；Taq 酶及 dNTPs 等购自上海英俊公司；引物：van A，van B，van C1 和 van C23 由上英俊公司合成。引物序列 vanA：P1:5，-CATGACATATCGGTAAAATC-3，P2:5，-CATGACATATCGGTAAAATC-3，（885bp）；vanB：P1:5，-CATGATGTGTCGGTAAAATC -3，P2:5，-ACCGGGCAGRGTATTGAC-3，（885bp）；vanC1：P1:5，