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大孔吸附树脂纯化马钱子总生物碱工艺探究 　 作者：管庆霞，王录娜, 李永吉, 杨志欣，王锐 【摘要】 　　目的研究大孔树脂纯化马钱子总生物碱的工艺条件，为马钱子总生物碱的工业化生产提供实验依据。方法以吸附量及解吸率为指标考察了AB-8, D101, HPD-500和LSA-10等4种型号的树脂,确定纯化马钱子总生物碱的最佳树脂。并通过单因素分析考察该树脂分离、纯化马钱子总生物碱的最佳工艺条件。结果AB-8型大孔吸附树脂对马钱子总生物碱具有较好的分离能力。通过大孔树脂分离纯化后,马钱子样品总生物碱的纯度可达70%,洗脱率可达到90%以上。结论AB-8大孔吸附树脂综合性能较好,适合于马钱子总生物碱的分离纯化。 【关键词】 马钱子 总生物碱 大孔吸附树脂 纯化 　　马钱子为马钱科植物马钱Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟种子［1］，具有通络止痛、散结消肿的功效，在我国有悠久的药用历史，疗效显著、确切，为历代医家所推崇。现代研究证明其主要含总生物碱（其中最主要的成分为士的宁、马钱子碱）。因此,分离纯化马钱子总生物碱具有重要的意义。 　　大孔吸附分离技术是目前应用较广的一种中药深加工技术, 具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点［2］，已被广泛应用于中草药有效成分的分离纯化。但马钱子总生物碱的大孔吸附树脂的富集,分离和纯化尚未见报道。本实验选择4种大孔吸附树脂分离马钱子总生物碱，以士的宁和马钱子碱为定量指标，筛选出最佳的树脂、洗脱溶剂及用量，以达到开发相应制剂的要求。 　　1 仪器与试药 　　Waters2695-2996高效液相色谱仪，含有在线脱气、高压四元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器（DAD）、Empower色谱工作站；HY-4型调速多用振荡器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；AB265-S电子分析天平（德国梅特勒公司)；RE-52型旋转蒸发仪(上海青浦泸西仪器厂)。 　　砂烫马钱子购于哈尔滨市同仁老号；甲醇（美国Dikma公司）为色谱纯;水为娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；其它试剂均为分析纯。士的宁、马钱子碱对照品（中国药品生物制品检定所）；大孔吸附树脂AB-8、D101（南开大学化工厂）；LSA-10（西安蓝晓科技有限公司)；HPD-500(河北沧州宝恩化工有限公司)。 　　2 方法与结果 　　2.1 总生物碱含量的测定 　　2.1.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇水乙酸三乙胺（76∶230∶2.4∶0.3）；流速1. 0 ml/min；检测波长254 nm；柱温30℃。 　　2.1.2 标准曲线的绘制精密称取士的宁对照品6 mg，马钱子碱对照品5 mg定容置同一25 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。分别精密移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml至10 ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀。精密吸取10 μl,注入液相色谱仪。以峰面积(A)为纵坐标,对照品浓度(C)为横坐标作图,得标准曲线。回归方程为: 　　士的宁 A=-87 369+22 961C，r=0.999 8 　　马钱子碱 A=-69 869+12 255C，r=0.999 7 　　结果表明,士的宁浓度在24～120 μg/ml,马钱子碱浓度在20～100 μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系。 　　2.2 样品溶液制备马钱子药材用6倍量pH=5, 50%的乙醇溶液提取3次,回流提取2 h/次,合并3次滤液，抽滤。减压浓缩回收至无醇味,加水稀释到适当浓度备用。 　　2.3 大孔吸附树脂静态吸附和解吸试验考察 　　2.3.1 树脂预处理大孔树脂分别用95%乙醇浸泡24 h,充分溶胀,用乙醇洗至溶液加适量蒸馏水无白色浑浊现象时为止,最后用蒸馏水洗至无醇味,备用。 　　　2.3.2 静态吸附容量测定精密量取预处理好的4种大孔吸附树脂1 g（湿重）加入马钱子样品液30 ml中,密封置于振荡器(25℃, 100次/min)中振荡，充分吸附, 12 h后从上清液中取样,检测溶液中总生物碱含量的变化,计算饱和吸附量。结果见表1。 　　2.3.3 静态解吸试验分别将上述充分吸附了马钱子总生物碱的4种树脂进行过滤,除去水液,再将其置于具塞锥形瓶中,加入95%乙醇溶液30 ml密封,置恒温振荡器中进行解吸,12 h后从上清液中取样,检测总生物碱含量变化,计算解吸率。结果见表1。 　　饱和吸附量（mg/g）=［(初始浓度-吸附后浓度)×吸附液体积］/树脂重量（湿重） 　　解吸率(%)=［洗脱液浓度×洗脱液体积］ /饱和吸附量