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屋尘螨cDNA表达文库构建及初步鉴定 　 作者：刘良，彭江龙，周鹰，崔玉宝 【摘要】 目的： 构建屋尘螨cDNA表达文库. 方法： 用RNAiso Reagent试剂盒提取屋尘螨Total RNA，用Poly AT tract mRNA分离试剂盒提取mRNA，用Clontech公司SMARTTM PCR cDNA library kit反转录合成第1链cDNA，用LDPCR合成第2链cDNA并扩增，PCR产物与MaxPlax TM试剂盒体外连接包装，建成未扩增的cDNA文库，计算其滴度和重组效率后进行文库扩增并测定扩增文库的滴度. 结果： cDNA文库未扩增时滴度为9.148×106，重组效率达93.88%以上，文库扩增后滴度为7.628×109，插入片段平均1.63 kb. 结论： 成功地构建了高质量的屋尘螨cDNA表达文库. 【关键词】 欧洲屋尘螨，基因文库 0引言 　　随着现代分子生物学技术的发展，应用基因工程变应原诊断和治疗变态反应性疾病已成为当代变态反应学研究的主流. 研究表明，基因工程技术通过减少重组变应原IgE结合的抗原表位，能有效地降低IgE介导的过敏反应，同时通过保留变应原T细胞识别所必须的结构域，因而具有较好的免疫原性，减少免疫治疗的危险性，可以提高脱敏治疗的效果［1-2］. 　　制备基因工程变应原的前提是获取目的基因. 从理论上讲，研究者可从一个合格