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微波提取杜仲总黄酮工艺探究 　【摘要】 　　目的研究微波提取杜仲总黄酮的最佳工艺条件。方法利用微波技术通过正交实验方法，探讨杜仲总黄酮最佳提取工艺条件。结果因素相关性为:乙醇浓度＞提取温度＞提取时间＞料液比；杜仲总黄酮提取的最佳工艺条件为微波时间9min，乙醇浓度60%，提取温度80℃，料液比1∶10。结论微波技术具有提取效率高，提取速度快，能量消耗小等特点，应用于中草药有效成分提取的前景广阔。 【关键词】 微波技术 杜仲 总黄酮 正交实验 　　杜仲Eucommia ulmoides是杜仲科杜仲属植物，它含有绿原酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、黄酮类物质、地普黄内酯、多糖等活性成分，具有补肝肾、强筋骨、降压、抗菌、利尿、抗肿瘤、抗衰老、增强免疫等药理作用, 被广泛用于药品和疗效食品的研究与开发中［1，2］。微波技术作为一种新兴的技术，近年在提取天然植物（特别是中草药）中的有效成分得到广泛应用［3，4］，与常规提取方法比较，具有选择性高、快速高效、溶剂消耗少、活性成分得率高、不产生噪音、适合于热不稳定物质等特点。黄酮类化合物是杜仲的主要有效成分之一，具有多种生物活性。杜仲黄酮类化合物含量的高低，是判断杜仲相关产品的重要指标［5］。近年来，对杜仲黄酮类化合物的提取方法研究是热点，本实验采用微波技术通过正交实验提取杜仲总黄酮。 　　1 器材 　　1.1 原料杜仲，购于湖南长沙康尔佳药店，粉碎过40目筛，80℃烘干备用。 　　1.2 试剂与仪器乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、NaOH等，均为分析纯；芦丁对照品，购于中国上海医药化学试剂公司；721型分光光度计，MDS-6型温压双控微波萃取仪，粉碎机。 　　2 方法 　　2.1 标准曲线的绘制精密称取在105℃下干燥至恒重的芦丁对照样品10 mg，加80%乙醇溶解后定容至25 ml。分别移取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml置10 ml容量瓶中，各加5%亚硝酸钠0.3 ml，6 min后加10%硝酸铝0.3 ml，放置6 min，加4%氢氧化钠溶液4ml，以80%乙醇稀释至刻度，摇匀。在510 nm波长下，以空白试剂为参比测定吸光度，得到回归方程为：A＝0.102 8 C-0.011 2（R2=0.990 5）。 　　2.2 样品黄酮含量的测定称取2.0 g杜仲粉，加入提取溶剂，放入MDS-6 型温压双控微波萃取仪提取。定时取出，过滤，滤液移至100 ml容量瓶，定容。分别用分光光度仪，按标准曲线制备各项处理，在510 nm波长测定吸光度，代入回归方程，计算总黄酮含量。 　　2.3 最佳微波提取条件的确定分别称取2.0 g杜仲粗粉，根据预实验结果，选择提取温度，提取时间，乙醇浓度，料液比为实验因素，采用L9（34）按表1方法进行微波提取，提取液过滤，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。 　　2.4 对比实验 　　煎煮法：称取杜仲粉10 g，加水200 ml，浸泡30 min，煮沸后，文火煎60 min，过滤，共煎煮两次，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。 　　连续回流提取法：称取杜仲粉10 g，加60%乙醇200 ml，水浴回流90 min，过滤，共提取两次，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。 　　表1 因素水平（略） 　　　3 结果 　　3.1 正交实验结果见表2。 　　由表2可知，影响杜仲总黄酮提取率的因素主次顺序为：乙醇浓度(C)gt;提取温度(A)gt;提取时间(B)gt;料液比(D)，杜仲总黄酮微波提取的最佳工艺条件为：A3B3C1D1，即提取温度为80℃，提取时间为9 min，乙醇浓度为60%，料液比1∶10；正交实验的方差分析(见表3)结果显示，乙醇浓度差异显著，对杜仲总黄酮提取率的影响起最主要作用，其它在此实验范围内没有显著差异，对测定结果的影响较小，与直观分析结果(见表2)相吻合。 　　3.2 验证实验为考察正交实验得到优选工艺条件的稳定性，按其重复实验6次，杜仲黄酮提取率为2.13 mg/g，RSD＝0.833%(n＝6)，说明该工艺稳定可行。 　　表2 正交实验结果（略） 　　3.3 对比实验结果见表4。 　　由表4可知，微波提取方法的黄酮提取率明显高于其它两种方法，且提取时间最短，提取溶剂用量最少。 　　表3 正交实验方差分析结果（略） 　　*表示显著影响,Δ表示影响不显著；F0.1(2,2)=9; F0.05(2,2)=19.0; F0.01(2,2)=99.0 　　表4 提取方法比较（略） 　　4 结论 　　微波提取杜仲总黄酮的最佳条件为：提取温度80℃，提取时间9 min，乙醇浓度60%，料液比1∶10，此时黄酮得率最高，为2.130 mg/g。 　　与传统的煎煮法和回流提取法相比，微波提取法具有提取时间