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慢支咳喘灵对免疫低下小鼠免疫功能影响.doc

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慢支咳喘灵对免疫低下小鼠免疫功能影响

慢支咳喘灵对免疫低下小鼠免疫功能影响   作者;肖波,刘晖,陈康桂,凌翠 [摘要] 目的 探讨慢支咳喘灵对免叩拖滦∈竺庖吖δ艿挠跋臁?STRONGgt;方法 制备免疫低下功能模型小鼠,给予慢支咳喘灵,14天后进行免疫功能的测定。结果 中、高剂量的慢支咳喘灵应用后均可使免疫功能低下小鼠的体重、胸腺和脾脏重量显著增加(Plt;0.05或Plt;0.01)’’但小剂量组作用不甚明显。与模型组比较,慢支咳喘灵中、高剂量具有显著促进吞噬作用(Plt;0.05或Plt;0.01);高剂量时的吞噬作用和正常对照组差异无显著性(Pgt;0.05),但小剂量组作用不甚明显;高、中、低3个剂量组的慢支咳喘灵对小鼠迟发型变态反应均有显著的抑制作用(Plt;0.05或Plt;0.01),可显著提高血清溶血素水平(Plt;0.05或Plt;0.01)。结论 慢支咳喘灵可提高机体的免疫功能。 [关键词] 慢支咳喘灵;免疫低下;小鼠;免疫功能 慢支咳喘灵口服液(以下简称慢支咳喘灵)主要由生晒参、茯苓、淮山、黄芪、麦冬、川贝、胎盘、蛤蚧等20多味中药组成,临床主要用于治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者[1]。本研究通过其对免疫低下小鼠免疫功能的影响,为其临床应用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 慢支咳喘灵口服液(MZK),本院制剂室自制;氢化可的松注射液(Hy)由上海信谊药厂生产(批号040313)。鸡红细胞悬液(CRBC)的制备[2]:于无菌操作下,自鸡翼下静脉取血’’在4 ℃冰箱于Alsever氏液中保存,临用时用生理盐水洗涤3次’’ 2000 rpm离心10 min得压积鸡红细胞’’再按所需浓度稀释。补体:以3只豚鼠血液离心提取血清’’配成10生理盐水溶液。1%二硝基氯苯(DNCB)溶液:每次致敏或攻击前新鲜配制1%DNCB丙酮麻油溶液(丙酮∶麻油为1∶1)5 ml倒入小瓶内’’盖好并用胶布封口’’备用。 1.2 仪器 721型分光光度计’’上海分析仪器厂。 1.3 动物 SPF级KM小鼠,体重18~22 g,雌雄各半(合格证号为2004A027)由广东医学院实验动物中心提供。实验室温度(23±2)℃’’相对湿度40%~70%,常规饲料喂养’’自由饮水。 1.4 动物分组与免疫低下模型小鼠的制备 除正常对照组外,其余小鼠均给予Hy造模,末次注射后记录小鼠体重’’将免疫低下小鼠按体重随机等分4组:模型组和高、中、低药物组。药物组分别按0.03、0.06和0.12 ml/kg灌胃给药(分别相当于临床等效量、2倍量和4倍量)给予慢支咳喘灵口服液,正常对照组和模型组均给予蒸馏水,每天给药1次,连续14天。 1.5 免疫低下功能模型小鼠的制备方法[3] 按20 mg/kg腹腔注射Hy’’ 隔天1次’’共5次。在注射Hy期间’’动物逐渐出现体重减轻、活动减少、反应迟钝、蜷缩弓背、毛松等免疫低下的体征’’正常组小鼠无明显变化。 1.6 实验数据的处理 采用中国数学药理学会提供的NDST软件进行方差分析。 2 结果 2.1 对小鼠体重、胸腺和脾重的影响 60只小鼠,按上述方法进行造模、分组和用药。第15天处死小鼠称重,并取胸腺和脾脏称重。结果发现Hy可使小鼠的体重显著降低,比正常组下降了31.5%’’ Plt;0.01);胸腺和脾脏显著萎缩,其重量分别为正常组小鼠的46.6%和24.8%(Plt;0.01)。中、高剂量的慢支咳喘灵应用后均可使免疫功能低下小鼠的体重、胸腺和脾脏重量显著增加(Plt;0.05或Plt;0.01)’’但小剂量组作用不甚明显。结果见表1。 表1 慢支咳喘灵对小鼠体重、胸腺和脾重的影响 (x±s,n=12) 注:与正常对照组比较,*Plt;0.05’’**Plt;0.01;与模型组比较,ΔPlt;0.05,ΔΔPlt;0.01 2.2 对小鼠单核细胞吞噬炭粒能力的影响 参照小鼠炭粒廓清法[2]取小鼠60只’‘ 按上述方法进行造模、分组和用药。各组末次给药后1h’’于小鼠尾静脉注入12.5%中华墨汁0.1%ml/10g’’分别于注墨汁后1 min及5 min’’分别用特制的取血吸管从小鼠眼眶后静脉取血0.025 ml’’立刻吹入0.1Na2CO3液2 ml中’’吹吸吸管数次’’洗净吸管壁附着之血’’取血完毕后’’再取0.025 ml正常小鼠之血溶于2.0 ml Na2CO3液中校零’’于紫外可分光光度计680 nm处比色’’按下式计算吞噬指数K及吞噬系数(校正吞噬指数)α: K=lgC1-lgC2 T2-T3 α=W WLSS K (W为体重’’WLS为肝脾合重) 结果见表2。与模型组比较,慢支咳喘灵中、高剂量具有显著促进吞噬作用(Plt

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