扶正利湿活血复方对鸭胚肝细胞中鸭乙型肝炎病毒抑制作用.doc

扶正利湿活血复方对鸭胚肝细胞中鸭乙型肝炎病毒抑制作用 　【摘要】 目的探讨扶正利湿活血中药复方水提物和醇提物对先天感染乙肝病毒（HBV）的鸭胚肝细胞乙型肝炎病毒（DHBV）的抑制作用。方法荧光定量PCR技术对鸭胚尿囊液DHBV DNA分析筛选先天感染DHBV的阳性鸭胚，对DHBV阳性的鸭胚肝细胞原代培养；细胞接种后第3天分组加入不同剂量扶正利湿活血复方水提物和醇提物，共6 d，分别于药物干预前、药物干预第3天、第6天、停药第2天收集培养上清；辛酸钠法提取上清DHBV DNA，实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测分析血清DHBV DNA的含量。结果水提物各剂量组组内不同时间点DHBV DNA载量相比无显著性差异（P﹥0.05），仅水提物低剂量组DHBV DNA载量显著低于相同时间点病毒对照组（Plt;0.05）；醇提物中、低剂量组在给药后和停药后培养上清DHBV均明显下降（组间、组内比较均为Plt;0.01），扶正利湿活血复方醇提物高剂量组在给药后第3天时DHBV明显下降（组间、组内比较均为Plt;0.01），第6天时组内比较无明显下降（Pgt;0.05），而在停药后第3天时组内与组间比较又均有显著性差异（均为Plt;0.01）。结论扶正利湿活血复方醇提物对鸭胚肝细胞中的DHBV有直接抑制作用，水提物在鸭体内可能不是通过直接抑制DHBV而起作用。 【关键词】 扶正利湿活血；鸭乙型肝炎病毒；肝细胞； 荧光定量PCR 　　Abstract:ObjectiveTo study the inhibitory effect of Chinese medicine compound prescriptions Fuzheng Lishi Huoxue on duck hepatitis B virus (DHBV) in duck embryo liver Cells. MethodsThe duck embryo liver cells with congenital infection DHBV were incubated with different concentration extracts of Chinese medicine compound Fuzheng Lishi Huoxue, which was extracted with water and alcohol respectively. The level of DHBV DNA in culture supernatants was detected using FQ-PCR at different time points after the cell being inoculated. ResultsWater extract of Fuzheng Lishi Huoxue had no significant effect on supernantant DHBV DNA Content (P﹥0.05), but alcohol extract of Fuzheng Lishi Huoxue supernatant DHBV DNA content (Plt;0.01).ConclusionThe alcohol extract of Chinese medicine Compound Fuzheng Lishi Huoxue has direct inhibitory effect on duck hepatitis B virus (DHBV) in duck embryo liver cells. 　　Key words:Compound Fuzheng Lishi Huoxue; Duck Hepatitis B virus (DHBV); Liver Cell; FQ-PCR 　　乙型病毒性肝炎是当今世界上3大顽症之一,全世界范围内大约有4亿乙型肝炎病毒(HBV) 感染者［1］，我国一般人群中HBsAg流行率为9.09% ,估计约1.1亿人为慢性HBV 感染,占全世界慢性HBV感染者的1/3［2］。乙型肝炎抗病毒治疗的目标是持续抑制HBV复制、清除病毒,阻止肝脏炎症和坏死的进展,使疾病获得痊愈［3］。由于HBV 复制的原始模板cccDNA 难以消除,加之患者存在不同程度对HBV 的免疫耐受, 使得目前的治疗药物要达到彻底清除病毒是非常困难的，如核苷类似物抗HBV 作用强而快,但疗程难以确定,长期治疗均可产生耐药突变,在治疗过程中会引起ALT和HBV DNA的突破,可使病情恶化［4］。 中医药具有抑制HBV复制、抗肝纤维化、改善肝功能、保护肝细胞等作用,在治疗乙型病毒性肝炎方面有独特的优势。中药复方是中医防治疾病的特殊手段，最能体现中