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机械牵张应力对成骨细胞影响探究进展 　 作者：黎润光,邵景范,魏明发 【关键词】 机械牵张 正常骨骼处于一个吸收与生长重建的连续过程，成骨细胞与破骨细胞的生理活性保持着动态平衡，机械力学刺激是必不可少的条件之一。大量研究表明：机械力学刺激过低时，如宇航失重和长期卧床、肢体制动的人员均可导致骨密度、骨钙含量、骨基质蛋白、骨形成速度的降低；而绝经后妇女进行适当的活动锻炼、增加骨骼载荷，可减少其骨质疏松的发生。体内力学环境复杂，而离体实验可以通过设计特定的加载方式，来控制各种变量(力学的不同类型、大小、频率、时间和细胞的不同种系等)，观察细胞对力学刺激的响应。体内实验及临床应用，发现适当的牵张应力在骨折修复、正畸牙移动以及牵拉成骨(颌骨发育不足的矫治、骨缺损的整复、肢体延长)等中，能刺激骨组织自身生长与重建。成骨细胞是其中重要的感受与效应细胞，可通过力敏感离子通道、G蛋白与酪氨酸激酶、整合素受体与细胞骨架等多种途径，感受体内外力学刺激，并将力学刺激信号转化为细胞生物化学信号，介导力相关敏感基因表达，合成各种酶类等活性物质，激活信号网络级联反应，参与一系列复杂的生理病理活动。国内外有关机械牵张应力对体外培养成骨细胞影响的研究，为牵张应力在骨科的应用提供了大量的理论和实验依据。 1 牵张应力特点与加载装置的原理 在体内应力的作用下，骨组织变形，附着于骨基质上的成骨细胞可产生相应的牵拉变形，据此，牵拉张力的加载装置［1］主要是通过各种方法对培养基膜的牵拉(如图1～9)，使黏附于基膜上的成骨细胞被动伸展。应用此力学装置，能较好地模拟体内骨组织的受牵拉时的力学环境，可以给予细胞静止性或周期性、单向或双轴的牵拉，牵拉力大小及时间频率可以量化，加载刺激时或刺激前后均可用显微镜观察细胞情况，装置应用简单方便，价格便宜，重复性好。但牵拉张力装置依赖于培养基膜与细胞之间的作用，培养基膜各区域细胞受力不均匀，中间区域的细胞受力较小；而且体外培养基的应变明显大于骨基质，在单轴牵拉中，牵拉轴的垂直方向可对细胞产生收缩压力；在周期性培养基膜屈曲形变时，若屈曲率过大也会产生流体剪切力，这些都增加了干扰因素。成骨细胞经24 h培养，在基底膜完全贴壁、铺展后，细胞贴壁面面积为未贴壁前球状体俯视面积的4～5倍以上，厚度从边缘到最大处从零开始逐渐变化，按惯例此时通过对基底材料拉伸，给予细胞力学加载，在1 h内可达到最大增殖效果［2］，细胞这种铺展厚度变化特点使得细胞在随基底材料膜拉伸时，便于其内应变趋向更均匀一致。早期学者开展细胞培养的机械力学加载研究，在设计张力装置时，曾使用“悬滴培养”作局部牵拉的方式。目前，实验装置、材料及原理均得到了很大的改进，大多使用弹性恰当的硅胶或生物高分子材料作培养基膜，用钛合金等对细胞无影响的材料作支架，更能模拟体内受牵引时的力学环境，其中使用最多的是“四点弯曲”、“Flexercell”及“均匀双轴”等模型。席雨涛［3］在研究心肌细胞受牵张刺激时，研制了一种新型的离心力牵拉装置(如图10)，其原理为：将贴有细胞的培养板置于匀速水平旋转的平台上，并以一定的速度旋转，使贴壁细胞产生一向外的离心力，从而被牵张。每个细胞距轴心的距离是恒定的，可通过控制转速相应控制作用于细胞的牵张力大小。 2 牵张应力对成骨细胞的生物学效应 机械应力可以引起骨代谢发生改变，但在体外实验，由于牵张应力的大小、频率、时间及使用装置不同，对成骨细胞的影响有所不同。一般来说，周期性应力对细胞的增殖功能及基因表达的作用明显大于持续性应力的作用。至于应力刺激成骨细胞的最佳频率大小、时间，不同的实验室报道有较大的差别，有时在同一实验，促进成骨细胞增殖的最佳力学条件却与酶分泌峰值也不同。 （1）细胞增殖周期及形态结构变化：众所周知，骨组织受过小或过大的力学刺激分别会导致废用性骨丢失及病理性编织骨，只有生理范围内的力学刺激才会加强骨的建造。唐丽灵等［4］用四点弯曲装置向成骨细胞加载不同水平的应力，发现500μ ε作用24 h后，成骨细胞的G2M期及S期的细胞数目增加，增殖指数上升，促进细胞增殖；而用1 000μ ε时，细胞周期情况却相反，处于G0G1期的细胞反而多，增殖指数下降，增殖受抑制。F．A．A．Weyts等［5］认为张力对成骨细胞增殖的影响与其分化时相有关，作者对人胎儿不图1 纵向单轴牵拉培养基膜 图2 纵向支点弯曲培养基膜 图3 曲状底物向上隆起培养基膜 图4 培养基膜中心被底物隆起 图5 真空负压向下吸引培养基膜使中心种植细胞的培养基区域牵拉 图6 流体正压向上隆起培养基膜 图7 光滑环状平板托起培养基膜，使培养基膜水平平均向牵拉 图8 光滑环状平板支撑培养基膜，周围受真空负压吸引，使培养基膜水平均向牵拉 图9 垂直双轴牵拉培养基膜 图10 离心牵拉装置同