玉屏风散对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能影响.docVIP

玉屏风散对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能影响 　【摘要】 目的: 探讨玉屏风散对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响。方法: 采用体外培养S180肉瘤细胞, 接种健康小鼠, 建立荷瘤小鼠模型, 并给予玉屏风散治疗, 观察计算抑瘤率,检测巨噬细胞吞噬活性, 巨噬细胞NO分泌量, 自然杀伤细胞(NK)活性, T淋巴细胞增殖能力及白介素2 (IL2)的产生及活性。结果: 玉屏风散可提高荷瘤小鼠吞噬细胞的功能, 增加巨噬细胞NO分泌量, 促进荷瘤小鼠白介素2 (IL2)的产生, 淋巴细胞的转化、 及NK细胞活性。结论: 玉屏风散可增强荷瘤小鼠的免疫功能, 抑制模型鼠肿瘤的生长。 【关键词】 玉屏风散 荷瘤小鼠 免疫功能 　　玉屏风散出自元·朱丹溪的《丹溪心法》, 由黄芪、 白术和防风等组成, 具有益气固表、 扶正止汗、 祛风御风等功效。前期研究发现玉屏风散对免疫抑制模型小鼠的免疫功能具有明显的促进作用[1]。众所周知肿瘤的发生、 发展与宿主的免疫系统功能密切相关, 二者互为因果, 肿瘤患者往往存在免疫抑制, 抵抗力下降、 反复感染等问题, 因此提高肿瘤患者机体的免疫功能, 对于肿瘤的防治具有十分重要的意义。本研究中我们探讨了玉屏风散的抗肿瘤效果以及对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用,为进一步开发免疫增强剂的抗肿瘤药物提供参考。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 C57BL/6纯系小鼠,雌雄各半（体质量18～22 g）购自吉林大学实验动物中心。S180细胞株购自中科院上海细胞库, 于牡丹江医学院病原生物学研究室昆明鼠腹腔接种传代。YAC1细胞株购自中科院上海细胞库。一氧化氮检测测试盒购自深圳晶美生物工程有限公司。RPMI1640培养基为美国Gibco 公司产品。刀豆蛋白A（ConA）、 MTT为Sigma公司产品。 　　1.2 方法 　　1.2.1 玉屏风散煎剂的制备 按《中华人民共和国药典》的标准取黄芪、 防风和白术常规煎煮3次, 去渣、 混合、 浓缩配成1 kg/L 的玉屏风水煎液。 　　1.2.2 动物分组与处理 C57BL/6纯系小鼠36只, 适应性饲养3 d后, 随机分成3组, 每组12只（雌雄各半）: （1）正常对照组（NC）; （2）荷瘤对照组(CC); （3）玉屏风散治疗组(Y)。除正常对照组外, 其余二组于左前肢腋下皮下注射2×109/L S180瘤细胞悬液0.2 mL, 接种24 h后开始灌胃给药, 玉屏风水煎剂组每只小鼠给以25 g/(kg·d)玉屏风水煎剂灌胃, 对照组给予等体积生理盐水灌胃, 连续灌胃给药12 d, 于第13 天处死小鼠进行相关检测。 　　1.2.3 对荷瘤小鼠体内抑瘤作用的观察 实验小鼠于末次给药24 h后处死。剥离瘤体, 称量瘤体湿重, 按下列公式计算抑瘤率。抑瘤率＝[对照组平均瘤质量（mg）－实验组平均瘤质量（mg）]/ 对照组平均瘤质量（mg）×100%。 　　1.2.4 NK细胞杀伤活性的规定 实验小鼠于末次给药24 h后脱颈处死, 无菌取脾, 常规制作脾细胞悬液, 调整细胞密度5×109/L; 另将连续传代培养之靶细胞YAC1细胞, 密度调为2.5×108/L, 各取100 μL加入96孔板(效靶比20∶1), 3复孔, 另设效应细胞对照孔、 靶细胞对照孔, 37℃、 50 mL/L CO2孵箱培养20 h离心弃上清100 μL, 加入MTT应用液(5 g/L) 10 μL, 再继续培养4 h, 加入溶解液DMSO 100 μL, 充分吹打至甲臜颗粒完全溶解后, 酶标仪测定A595值, 按公式计算NK活性。NK细胞活性=[靶细胞对照孔A595值－(实验孔A595值－效应细胞对照孔A595值)］/靶细胞对照孔A595值×100%。 　　1.2.5 小鼠腹腔巨噬细胞NO产生能力及吞噬功能测定 实验小鼠于末次给药24 h后处死, 常规制备腹腔细胞悬液, 调整细胞密度为2×109/L, 将该细胞加入24孔培养板内, 每孔1 mL。37℃、 50 mL/L CO2贴壁3.5 h, 倾去上清液, 洗涤细胞3次, 除去非黏附细胞, 加入EDTA重新悬浮细胞, 用含有10 mL/L FCS的RPMI1640培养液调细胞密度至1×109/L。37℃、 50 mL/L CO2培养24 h后, 收集各组培养上清液, 使用比色法试剂盒测定NO, 按说明书操作［2］。另将2×109/L腹腔巨噬细胞加入96孔细胞培养板内, 每份样品设3复孔, 每孔100 μL。在恒温37℃、 50 mL/L CO2培养箱中培养4 h后, 每孔加入100 μL、 4 g/L中性红生理盐水溶液, 继续培养4 h。取出培养板, 用0.01 mol/L,