玻璃体条件培养液对人视网膜色素上皮细胞生长活性及细胞周期影.docVIP

玻璃体条件培养液对人视网膜色素上皮细胞生长活性及细胞周期影 　【摘要】 　　目的：探讨在含有人玻璃体的条件培养液作用下体外培养的人视网膜色素上皮（HRPE）细胞形态学、细胞生长活性及细胞周期的改变。方法：将HRPE细胞培养在含100，250，500，1 000mL/L人玻璃体的DMEM条件培养液(VCM)。用倒置显微镜观测细胞的形态学改变，分别用MTT、流式细胞术检测细胞的生长活性及细胞周期的改变。 结果：不同体积分数的VCM使HRPE细胞的形态发生了改变，HRPE细胞出现了多核及更早的脱色素，类似成纤维细胞表型的生长状态。含100，250及500mL/L玻璃体体积的VCM处理后HRPE细胞的增长活性与对照组相比存在显著性差异（P均＜0.01），其中含250mL/L玻璃体的VCM刺激HRPE细胞增生的能力最强。VCM促使更多的HRPE细胞进入了DNA合成期（S期，6％～13％），含250与500mL/L玻璃体体积的VCM使HRPE细胞出现了异倍体的改变。结论：一定体积分数的VCM使HRPE细胞的S期比例增加，细胞增生能力增强。 【关键词】 视网膜色素上皮细胞　玻璃体　MTT　细胞周期　DNA倍体　流式细胞术 　　Effect of vitreous conditional medium on human retinal pigment epithelium cells’ proliferation and cell dividing cycle AbstractAIM: To investigate the change of cellular morphology, cell proliferative activity and cell dividing cycle in human retinal pigment epithelium (HRPE) cells after treatment of human vitreous conditional medium (VCM). METHODS: HRPE cells were treated with VCM including 100, 250, 500 and 1 000mL/L human vitreous respectively. Cellular morphology, cell proliferative activity and cell dividing cycle changes were observed by invert microscope, MTT assay and Flow Cytometry (FCM) assay respectively.RESULTS: HRPE cells showed polynucleation and pre-depigmenting, fibroblast-like phenotype. For HRPE cells proliferative activity, there was significant disparity between control and experimental group, especially for VCM with 250mL/L vitreous. VCM increased the HRPE cells’ proportion of phase S (6％～13％)and heteroploid was found in VCM with 250 and 500 mL/L vitreous. CONCLUSION: VCM can increase the S phase proption in HRPE cells’ cell dividing cycle, and increase their proliferative activity. · KEYWORDS: retinal pigment epithelium; vitreous; MTT; cell dividing cycle; DNA ploidy； Flow Cytometry 　　0引言 增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是裂孔性视网膜脱离手术失败的最主要原因,也是眼外伤、血管性和炎症性视网膜病变的一种结局[1]。它的启动和发展表现为过度的创伤愈合过程，其基本病理过程是视网膜色素上皮细胞（RPE）的移行、增生，在视网膜前和膜后及玻璃体腔内形成增生膜，最终增生膜的收缩导致牵拉性视网膜脱离，属于增生性疾病[2]。现已有大量关于生长因子，细胞因子通过复杂的信号途径作用于RPE细胞，导致其病理性增生的实验性研究的报道[3]。目前虽已明确，视网膜神经层损伤后造成的RPE细胞与玻璃体的接触是PVR