甘草中甘草苷含量测定方法探究.docVIP

甘草中甘草苷含量测定方法探究 　 作者：李翠 徐必学 张永萍 梁光义 【摘要】 目的改进2005年版《中国药典》Ⅰ部甘草项下甘草苷的含量测定方法。方法对甘草中甘草苷的提取方法进行了正交优选，并与药典方法进行了比较。结果最佳提取方法为用药材250倍体积的0.3%氨水，80℃水浴回流30 min，含量测定结果高于2005年版《中国药典》Ⅰ部项下甘草中甘草苷测定方法30%～50%。结论该方法能够准确地测定甘草中甘草苷的含量。 【关键词】 甘草 甘草苷 含量测定 正交实验 甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch．，胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat．或光果甘草Glycyrrhiza glabra L．的干燥根及根茎，有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效［1］。甘草苷作为甘草中的主要有效成分之一，2005年版《中国药典》（简称药典）新增了其HPLC含量测定方法。作者在实验中发现回流法提取甘草苷的提得率明显高于2005年版药典中采取的超声法，因此本研究对甘草苷含量测定前样品提取方法进行了正交优选，建立了其相对稳定可靠的含测方法。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器岛津LC-6AD高效液相色谱系统（岛津公司），TDA-8002电热恒温水浴锅（余姚市东方电工仪器厂），KQ300DA型数控超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。 　　1.2 试药甘草苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号111610-200503)；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯；甘草分别购于北京同仁堂贵阳分店、贵阳海健医药有限公司，经贵阳中医学院王世清教授鉴定，粉碎（过三号筛)，备用。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱分析条件色谱柱为HP hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm) ；流动相为乙腈-0.1%醋酸（20∶80）；流速0.8 ml·min-1；检测波长276 nm；柱温为室温；进样体积10 μl。对照品及样品分离的色谱图见图1。 　　2.2 对照品溶液的制备 取甘草苷对照品5 mg，精密称定，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。 　　2.3 提取方法的选择 取同一甘草粉末约0.2 g（6份），精密称定，分别置于6个50 ml具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇10 ml，称定重量，2份直接超声30 min（2005年版药典方法），2份浸泡12 h后超声30 min，2份水浴回流30 min，放冷，补足重量，静置。取上清液1 ml，置5 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按上述色谱条件进行测定，含量分别为0.84%，0.84%，0.91%，结果显示水浴回流提取效率最高。 　　图1 对照品及甘草样品的HPLC图（略） 　　2.4 提取溶剂的选择取同一甘草粉末约0.2 g（4份），精密称定，置100 ml圆底烧瓶中，分别加入甲醇、70%乙醇、0.5%氨水和70%乙醇（含0.5﹪氨）各10 ml，称定重量，80℃水浴回流2 h，取出放冷，补足重量，摇匀，静置。取上清液1 ml，置5 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度。检测方法同上。结果见表1。 　　表1 提取溶剂的考察（略） 　　由表1可以看出，0.5%氨水提取效率最高，故选择氨水作为提取溶剂。 　　2.5 正交实验结果及分析［2］根据初步实验，本文采用氨水浓度（%）、溶剂体积（倍）、回流时间（h）及水浴温度（℃）为考察因素，选用L9 (34) 正交表安排实验(重复实验2次) 。结果见表2～4。 　　表2 因素水平（略） 　　对实验结果进行直观分析，可以得出影响甘草苷提取的因素作用主次为Bgt;Dgt;Cgt;A，方差分析显示因素B 有显著影响。通过综合分析，优化后的最佳条件为A2B3C1D2，即用药材250倍体积的0.3%氨水，80℃水浴回流0.5 h。 　　　2.6 线性关系的考察 精密量取上述对照品溶液适量，配制成系列浓度的对照品溶液2.58，5.17，12.93，25.85，51.70，72.38，93.06 μg·ml-1。按上述色谱条件测定甘草苷峰面积。以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，Y=309 223 26.863 7X+296 30.780 6，r=0.999 9。结果表明，甘草苷在0.025 8 ～0.930 6 μg线性关系良好。 　　表3 实验结果（略） 　　表4 方差分析（略） 　　2.7 精密度实验 精密吸取同一对照品溶液(11.76 μg·ml-1)10 μl，重复进样5次，记录色谱图，以峰面积计算，其RSD为1.15%。 　　 　　2.8 重复性实验 精密称取同一甘草粉末样品（6份），按上述方法提取、