痛泻二草方对肝郁脾虚型UC模型大鼠肠黏膜屏障损伤影响.docVIP

痛泻二草方对肝郁脾虚型UC模型大鼠肠黏膜屏障损伤影响 　【摘要】 目的 探讨痛泻二草方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠肠黏膜屏障损伤的影响。方法 采用综合法成功建立肝郁脾虚型UC大鼠模型并给药治疗后，对比各组大鼠肠黏膜病理、充血积分、组织损伤评分及肠黏膜一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）检测结果。结果 痛泻二草方可显著降低UC模型大鼠肠黏膜充血积分、组织损伤评分及NO、NOS的含量（Plt;0.05或Plt;0.01），病理切片结果表明痛泻二草方可减轻结肠黏膜损伤。结论 痛泻二草方具有减轻UC模型大鼠炎性反应、减缓充血水肿和肠黏膜损害而促进溃疡愈合的作用。 【关键词】 痛泻二草方 溃疡性结肠炎 充血积分 组织损伤评分 NO NOS 溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）临床上以腹痛、腹泻和黏液脓血便、里急后重等为主要表现，以肠黏膜物理屏障、生物屏障和化学屏障损伤为病理基础，类似中医学所论“腹痛必泻，泻后痛减，痛泻交作”之症。中医学认为UC病位在肠，但其发病与肝脾密切相关，其病机重点之一为“肝郁脾虚”，故治疗多从调和肝脾入手。痛泻二草方在临床用来治疗肝郁脾虚型UC疗效显著，故本研究选用大鼠作为研究对象，探讨其对肝郁脾虚型UC模型大鼠肠黏膜屏障损伤的影响。 1实验材料 1.1 实验动物 采用SPF级Wistar大鼠60只，质量(180±20)g，雌雄各半，标准饲料喂养（动物及饲料均由甘肃中医学院实验中心提供）。动物合格证号：医动字FCXK(甘)2004-006号。 1.2 药品、试剂及主要仪器 补脾益肠丸：广州陈李济药厂生产，批号SVD04012，临用前用蒸馏水配成所需质量浓度。痛泻二草方由鱼腥草、仙鹤草、炒防风、陈皮、炒白术、炒白芍按特定剂量比例组成。痛泻要方由炒防风、陈皮、炒白术、炒白芍按一定剂量比例组成。受试方药分别浸泡40 min，煎煮滤过，95 ℃水浴浓缩（痛泻二草方每毫升含生药1.1 g；痛泻要方每毫升含生药0.5 g）。药物制成后高压灭菌消毒分装，4 ℃冰箱保存备用。 一氧化氮（NO）测试盒，批一氧化氮合酶（NOS）测试盒，批考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，批以上均为南京建成医学生物研究所提供。福氏完全佐剂，批北京拜尔迪生物技术有限公司）。DF110型电子分析天平、721型可见分光光度计、XYJ 80-2离心机、HH-4数显恒温水浴箱。 2实验方法 2.1动物分组、造模及给药 实验大鼠（筛选排除质量偏小、生命活力低下的大鼠10只）按质量编号，按照随机数字表法分为空白组、模型组、痛泻二草方组、痛泻要方组及补脾益肠丸组5组，每组10只。参考文献[1-2]， 采用中医证与西医病相结合的UC动物模型复制方法。用20 %乌拉坦4 mL/kg麻醉大鼠后，于模型组、痛泻二草方组、痛泻要方组、补脾益肠丸组首次足跖内注射异体大鼠结肠抗原（加入福氏完全佐剂）2 mg。于第7，14，21 d分别于足跖、腹腔内注射抗原（末次注射不加佐剂）4 mg，用特制针头入大鼠肛门内约8～10 cm处注入5 %醋酸1 mL，同时用胶布束绑各组大鼠后肢，限制活动及饮食，每天约8 h，连续3周，三法复合建立肝郁脾虚证UC大鼠模型。 等效剂量以成人常规剂量按人与动物体型系数折算，痛泻二草方组（11 g/kg）、痛泻要方组（5 g/kg）、补脾益肠丸组（2 g/kg）分别灌服以上药物的浓缩液或混悬液，1次/d；空白组与模型组每日灌胃2 mL生理盐水，1次/d，连续4周。所有大鼠均以普通灭菌饲料喂养。 2.2标本采集与处理 各组动物灌胃结束禁食不禁水24 h后脱颈椎法处死，迅速剖腹，剖取距肛门 2～10 cm处结肠共 8 cm，沿肠系膜缘剪开肠腔，用冰生理盐水冲洗肠内容物，冲洗干净后用滤纸拭干，迅速将其剖开、展平，肉眼观察黏膜，并做结肠组织损伤积分比较（充血评分：0分，无充血；1分，充血小于全长1/3；2分，充血在全长1/3～2/3之间；3分，充血大于全长2/3。总评分标准：0分，无损伤；1分，局部充血水肿,但未出现糜烂；2分，有轻度糜烂，但lt;0.5 cm；3分，糜烂在0.5～1.0 cm之间；4分，糜烂gt;1.0 cm。既充血水肿又有糜烂累计加分）。然后将部分结肠组织以10 %福尔马林固定，做病理切片，在光镜下行病理学检测。 结肠组织匀浆制备：将剩余结肠称重后用眼科小剪刀尽快剪碎，置于匀浆器中用9倍冰生理盐水匀浆（匀浆器的末端置于放冰块的冷水中），后以3500 r/min离心10 min，取上清液置4 ℃冰箱保存待测。肠黏膜NO、NOS测定采用比色法，具体操作参照试剂盒说明书。 2.3统计学处理 运用SPSS10.0