痛风饮对实验性急性痛风性关节炎大鼠抗炎镇痛作用机制探究.docVIP

痛风饮对实验性急性痛风性关节炎大鼠抗炎镇痛作用机制探究 　 作者：杨洪霞 杨丽芸 张灵敏 靳红微 【摘要】 目的研究民间验方痛风饮1付对急性痛风性关节炎的抗炎镇痛作用机制。方法通过对痛风模型大鼠应用痛风饮观察急性痛风性关节炎大鼠患肢压力及步态积分；踝周径变化值；检测白细胞，中性粒细胞，血清IL-1β、IL-6水平；以及右踝关节组织HE染色。结果痛风饮能明显减轻实验性大鼠踝关节肿胀程度，以及患肢站立及行走时压力积分，能降低白细胞、中性粒细胞及IL-1β、IL-6水平，具有改善致炎关节滑膜细胞增生和减轻炎细胞浸润的作用。结论痛风饮具有抗炎镇痛作用。 【关键词】 痛风饮 急性痛风性关节炎 微晶钠 白细胞 中性粒细胞 白细胞介素-1β 白细胞介素-6 急性痛风性关节炎是痛风的首发症状，常夜间发作，疼痛剧烈。西药秋水仙碱为治疗急性痛风性关节炎首选的一种特效药物，但有导致骨髓抑制、肝细胞损害、秃发、精神抑郁、上行性麻痹、呼吸抑制等副作用［1］。目前未见有1付中药治疗急性痛风性关节炎的报道，我们采用民间验方1付中药“痛风饮”治疗急性痛风性关节炎取得了良好的临床疗效。为进一步探究其作用机理，我们进行了痛风饮对急性痛风性关节炎的抗炎镇痛作用的实验研究。 1 材料 1.1 动物健康Wistar大鼠48只，全雄，体重（245±20）g，清洁级，河北医科大学实验动物中心提供。 1.2 药物痛风饮由伸筋草、萆薢、木瓜、五加皮、粉防己、羌活、独活、威灵仙、千年健、追地风、川牛膝、川芎、乳香、没药等组成，每毫升药液含生药约13.5 g；秋水仙碱溶液配成0.135 mg/ml。 1.3 试剂尿酸（uric acid），德国Aha Aesar公司；氢氧化钠（NaOH），北京市盛达化工技术有限公司；大鼠白细胞介素-1β（IL-1β）放免试剂盒，解放军总医院科技开发中心放免所；大鼠白细胞介素-6（IL-6）放免试剂盒，北京普尔伟业生物科技有限公司。 2 方法 2.1 尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备　取1g尿酸加入200 ml沸水中，用1 mol/L的NaOH溶液调pH 值至7.4，再加热至95℃，室温冷却并轻轻搅拌，4℃冰箱放置24 h，过滤，用滤纸将沉淀物水分吸干，放入70℃干燥箱烘干，取出，刮下粉末，放入研钵内研成细末，得微晶型尿酸钠，高温灭菌。用前以无菌生理盐水配成100 mg/ml的混悬液。 2.2 模型制备及给药　模型制作参照Coderre介绍的经典造模方法略做改进［2］。将48只大鼠随机分为4组，每组12只，即空白对照组（N）、阳性药秋水仙碱组（C）、中药痛风饮组（T）和模型组（M），除空白对照组外，余三组造模。造模后24 h对各组灌服治疗药物进行观察。根据人用药量与实验动物用药的换算公式，计算出大鼠的用药量，T组按13.5 g·kg-1·d-1，C组参照许延文《痹清胶囊抗痛风作用的实验研究》［3］中的给药量，按0.135 mg·kg-1·d-1剂量灌胃，所有药物分两次灌胃，共灌胃治疗1 d。M组和N组均与T组、C组同一时间灌服等量生理盐水作为对照。 2.3 实验观察 2.3.1 在造模成功后及治疗1 d后观察各指标并登记［2］。造模后24 h及灌胃治疗后24 h测量站立时及行走时患肢压力积分、步态积分。 大鼠站立及行走时患肢压力积分（A）：后肢正常压力，两后肢一样重量或平等负重为0分；模型侧后肢负重轻度减少，完全在地板上，但是趾不分为1分；后肢压力中度减少，腿屈曲仅有部分肢体负重，接触地板为2分；后肢负重严重减少，甚至患肢完全提起不负重为3分。 大鼠步行时患足步态积分（B）：正常步态为0分；轻度跛行，注射尿酸钠的下肢屈曲为1分；中度跛行，注射尿酸钠的下肢接触地板为2分；严重跛行，甚至出现3 肢行走步态，注射肢不负重为3分。 2.3.2 右后足踝周径变化值测量　分别于造模时、造模后24h及灌胃后24h测量右后足踝周径，在第一次测量时于测量处做一标记，读取数值，多次测量取平均值，并记录，计算造模前后踝周径差及造模后与治疗后踝周径差，作为踝周径变化值。 2.4 标本采集与指标检测　于给药后24 h断头取血，待血液自动流出后，用微量吸管采血，放入已加好稀释液的小试管内，用计数盘法进行白细胞计数；取血4 ml注入干燥试管，4℃离心3 500 r/min，15 min，分离血浆，置-20℃，测定相关指标。IL-1β，IL-6含量采用放射免疫法测定。将大鼠右踝关节在10%甲醛中固定48h，0.10 mol/L的硝酸溶液脱钙，包埋，切片4μm， 常规HE染色，采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像分析系统进行图像采集。 　 2.5 统计学方法采用SPSS for Windows 11.5统计软件进行分析，计量资料用One-Way AN