直肠癌远侧端浸润PET-CT显像及分子病理学探究.docVIP

直肠癌远侧端浸润PET/CT显像及分子病理学探究 　【摘要】 目的： 探讨直肠癌远侧端浸润PET/CT成像及其分子病理学改变,为直肠癌保肛手术提供评估价值. 方法: 对45例中低位直肠腺癌下缘进行标记；PET/CT检查并结合免疫组织化学方法对直肠癌的远侧端黏膜p53及CD34表达进行了研究. 结果: 直肠癌远侧端PET阳性段长度为4~12 mm，平均为7.0 mm；PET阳性段与阴性段p53与微血管密度有显著性的差异，PET阳性段p53与CD34均为高表达；直肠远侧端PET阳性段长度与肿瘤的大小、病理类型以及肿瘤分期无关. 结论: 肿瘤的PET/CT显像不但与肿瘤组织有关，而且还与肿瘤的癌旁组织有关，直肠癌远侧端PET/CT显像将为直肠癌的临床手术提供依据并对评估保肛手术具有一定的指导意义. 【关键词】 直肠肿瘤 全直肠系膜切除术 p53 CD34 微血管密度 体层摄影术 免疫组织化学 　　0引言 　　外科手术仍是治疗直肠癌最有效的手段［1］，由于直肠癌是否存在远侧端浸润以及远侧端浸润的标准如何界定等问题仍有分歧，因此直肠癌安全远侧切缘一直存在争议. 直肠癌的病理学检查是直肠癌诊断、分期及预后判断的金标准，然而，术前病理检查对肿瘤的生物学特性如肿瘤的远侧端浸润程度、肿瘤的淋巴结转移等的了解以及对手术方式评估意义却不大，相反影像学的检查更具有价值［2］. 为了确定直肠癌远侧端壁内浸润状况及直观反应直肠癌的远侧端浸润情况，本试验将结合PET/CT成像技术与分子生物学检测方法，对直肠癌远侧端浸润的影像学及分子病理学进行研究，旨在为中低位直肠癌能否保肛提供更为准确的术前评估. 　　1材料和方法 　　1.1材料200410/200606肠镜检查及病理证实为直肠中下段腺癌患者45例(已剔除非全直肠系膜切除术)，男26例，女19例，年龄28~78（平均51）岁. 其中中高分化腺癌28例，低分化腺癌17例；病理分期：DukesA期6例，B期27例，C期12例. 肿瘤直径gt;3 cm 31例，肿瘤直径lt; 3cm 14例. 所有患者肠道准备干净后在PET/CT检查前行肛肠综合治疗仪检查，于肿瘤下缘约0.5 cm及1 cm处横向缝合两针，用深静脉导管剪成0.5~1 cm长的细管，穿入线内结扎，作为标记物. 　　1.2方法 　　1.2.1显像方法及图像处理18FFDGPET全身显像:患者检查前禁食6 h以上,注射18FFDG前1 h口服30 mg普鲁本辛以减少胃肠道生理性浓聚，静脉注射18FFDG196444MBq(812 mCi),（南京军区福州总医院PET中心自行生产,放射化学纯度gt;99%）. 平卧安静休息45~60 min后,行GE Advance Ⅱ PET/CT仪全身显像,图像通过迭代法重建为横断、冠状断及矢状断层图像,每层厚度为1.25 mm. 　　1.2.2图像分析由2名核医学医师对PET显像图进行读片，采用标准化摄取值(standardized uptake value, SUV)评价病灶内18FFDG浓聚程度,以SUVlt;或gt;2.5为鉴别病灶的良恶性的分界值［3］. 以直肠肿瘤远侧端SUV≥2.5定为PET/CT阳性段黏膜；测量两标记线之间的距离,肿瘤中心SUV值及PET显像大小(最大横断面/矢状面及上下缘)及PET局限性浓聚下缘SUV值2.5处位置；观察肿瘤的大小、肿瘤占肠壁的比例、直肠系膜的浸润以及直肠系膜或肠系膜下动脉淋巴结是否转移情况. 　　1.2.3标本制作及取材开腹按全直肠系膜切除术(total mesorectal excision,TME)手术原则［4］进行直肠癌TME保肛手术,切除标本解剖直肠系膜,观察肿瘤在肠壁及直肠系膜内的浸润情况. 查出淋巴结送病理,于肿瘤的对侧纵行切开直肠管壁,轻轻牵拉标本两切端，使肿瘤下缘两标记线的距离与PET/CT上检测的距离一致（自然位置）. 用大头钉固定后，再次测量肿瘤大小及肿瘤下缘与标记线之间距离. 肿瘤下缘组织以PET/CT检查SUV为2.5处为界,取相等长度的宽为0.5 cm两段组织,标记为PET阳性段与PET阴性段. 各组织分别进行p53及CD34免疫组织化学染色. 　　1.2.4病理及免疫组织化学检查CD34,p53均为鼠抗人单克隆抗体，为Maixin.Bio公司产品（即用型），免疫组化试剂盒用Maixin.Bio公司EliVisionTMplus广普试剂盒. 免疫组织化学染色方法采用PAP法进行染色，p53及CD34表达的阴性对照染色均采用PBS代替第一层抗血清，其余步骤均一致. 　　1.2.5微血管密度(microvessel density，MVD）检测［5］用CD34标记微血管内皮细胞，呈棕黄色，在肿瘤组织中分布于肿瘤及间质组织中