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知母总黄酮提取工艺探究 　 作者：闻永举， 能力强 ，申秀丽 【摘要】 目的建立知母中总黄酮提取工艺，为知母总黄酮开发和利用提供依据。方法对提取方法、提取溶剂、提取时间进行研究，采用紫外分光光度法测定知母中总黄酮含量。结果知母中总黄酮较佳提取工艺为： 70% 乙醇超声提取 30min。结论该方法简便、快速、准确，可作为知母中总黄酮提取及含量测定方法。 【关键词】 知母； 紫外分光光度法； 总黄酮； 芒果苷 Abstract：ObjectiveTo estable a method of extraction technology of total flavonoids to offer a basis for Anemarrhena’s development. MethodsIt was studied on method, solvent, time of extraction of Anemarrhena’s tatol flavonoids and was determined tatol flavonoids’ content of Anemarrhena by UV-spectrophotometry. ResultsIt was best extraction technology of Ultrasonic Extraction total flavanoids for 30min by 70% acohol.ConclusionThis method was simple, quick, and accurated, and suitable to extract and determine total flavonoids’ content of Anemarrhena. Key words：Anemarrhena； UV-spectrophotometry; Total flavonoids； Mangiferin 知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodelloides Bge.的干燥根茎。中医理论认为，知母性寒，味苦、甘；入肺、肾、胃经；具有清热泻火、生津润燥功能。临床用于外感热病、高热烦渴、肺热燥咳、骨蒸潮热、内热消渴、肠燥便秘［1］等症。研究表明知母中富含皂苷、黄酮类化合物 ［2］，其总黄酮又以芒果苷含量最高［3］。具有抗病原微生物、抗血小板聚集、降血糖、解热、抗炎、降低转氨酶等生理活性［4，5］，芒果苷是其止咳的有效成分。对于知母的化学研究，文献多偏重其皂苷类成分提取分离纯化研究，忽视了知母另一类有效成分——总黄酮类成分研究。因此，很有必要对知母总黄酮进行提取工艺研究。 1 仪器与试药 1.1 仪器精密天平 BS224S（德国塞多利斯）；UV-4501S 紫外分光光度计(天津市港东科技发展有限公司)；超声清洗机 SK8210LHC（上海科导超声有限公司）。 1.2 试药知母（产地河北，河南，安徽）；芒果苷为对照品（中国生物制品检验所，批号111607－200301）；乙醇、甲醇均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 实验条件与方法的建立 2.1.1 对照品的选择很多文献报道中药制剂中总黄酮的含量测定多数采用芦丁作为对照品。采用芦丁作为对照品，解决了部分中药或中药制剂中本身缺少黄酮对照品的问题，在没有合适的对照品情况下，也不失一种测量总黄酮的可行的方法。芒果苷是知母中含量较高的黄酮类化合物，是其清热作用的有效成分，同时还具有抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫抑制、利尿、预防肥胖等作用。因此，用知母中含量较高且具有抗病毒作用的专属性活性成分作为对照品来测定知母总黄酮的含量更加有意义。 2.1.2 最大吸收波长的选择 NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法测定总黄酮的原理［6］，是黄酮母核所含有的游离羟基在 NaNO2-Al（NO3）3 存在的条件下与金属铝离子形成络合物而显色，在波长 500 nm 左右有最大吸收。本实验中所用的对照品是知母中主要黄酮类成分芒果苷对知母总黄酮进行含量测定。因此将芒果苷溶液及知母总黄酮提取液显色后在 200～400 nm 处用可见-紫外分光光度计扫描，知母总黄酮和芒果苷均在 258nm 有最大吸收波长，结果见图 1。故选择含量测定的检测波长为 258 nm。 Ⅰ知母总黄酮紫外吸收波谱图 Ⅱ芒果苷的紫外吸收波谱图 图1 知母总黄酮、芒果苷的最大紫外吸收波谱图 2.2 对照品溶液的制备取芒果苷适量，于 60℃ 减压干燥至恒重，精密称定，加 70％ 乙醇溶解，制成每毫升含 32 μg 溶液，即得。 2.3 线性关系实验 精密吸取混合对照品溶液贮备液 1，2，5，10，15，25 ml，分别置于 50 ml 量瓶中，加 70％ 乙醇稀释