硒及镁拮抗二氧化硅致肺泡巨噬细胞氧化损伤探究.doc

硒及镁拮抗二氧化硅致肺泡巨噬细胞氧化损伤探究 　 作者：谈伟君,季晖,何整,陈国银 ［摘要］目的:观察亚硒酸钠与硫酸镁单独及联合应用对染尘肺泡巨噬细胞丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）及过氧化氢酶（CAT）水平变化的影响，寻找二者的最佳剂量组合。方法:采用大鼠肺灌洗法纯化获得肺泡巨噬细胞（1×109 L-1），同时加入SiO2及不同浓度的亚硒酸钠溶液、硫酸镁溶液、亚硒酸钠+硫酸镁溶液，于37℃、5%CO2培养条件下培养18 h后，检测MDA、H2O2含量及CAT活性。结果:亚硒酸钠与硫酸镁单独以及两者联合应用都可以使SiO2染毒的肺泡巨噬细胞MDA及H2O2含量下降，CAT活性有所增高,且以10μmol#12539;L-1亚硒酸钠与10μmol#12539;L-1硫酸镁联合作用效果最好。结论:亚硒酸钠与硫酸镁在体外可有效拮抗SiO2粉尘的细胞毒性作用，二者合用效果更佳。 　　［关键词］二氧化硅;亚硒酸钠;硫酸镁;肺泡巨噬细胞;氧化损伤;大鼠 　　硒与镁是人体必需的元素，具有许多极为重要的生理生化作用,参与机体多种酶的构成，在体内抗氧化过程中发挥重要作用。已有研究证明，硒在体外有一定拮抗粉尘细胞毒性的作用［12］。硫酸镁在拮抗SiO2细胞毒性的作用与及硒、镁两种物质联合应用的研究尚未见报道。本研究主要探讨硒、镁两种元素单独及联合应用对染尘巨噬细胞丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）含量及过氧化氢酶（CAT）活性的影响，以期为矿物元素应用于矽肺的防治提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　11 材料 　　111 实验动物 健康雄性Wistar大鼠，体质量180～220g,由本校实验动物中心提供。 　　112 石英粉尘 采用标准的SiO2粉尘，由中国预防医学科学院提供，游离SiO2的含量大于97％，粒径小于5μm的占95％以上，临用前新鲜研磨后用生理盐水配成10g#12539;L-1的悬液待用。 　　113 RPMI 1640培养液 日本产RPMI 1640培养基干粉，每袋104g，溶于1 000ml去离子水，抽滤除菌并分装，4℃冰箱保存备用。内含2mmol#12539;L-1的L谷氨酰胺、100U#12539;ml-1青霉素、100μg#12539;ml-1链霉素。临用前加入10%小牛血清。 　　114 亚硒酸钠（Na2SeO3） 由上海金山县兴塔化工厂生产，分析纯，批号：940802，临用前用生理盐水配成1.0mmol#12539;ml-1的溶液待用。 　　115 硫酸镁（MgSO4） 由上海试四赫维化工有限公司生产，分析纯，批号：041107，临用前用生理盐水配成05mmol#12539;ml-1的溶液待用。 　　116 MDA、H2O2、CAT试剂盒 由南京建成生物工程研究所提供。 　　12 方法 　　121 肺泡巨噬细胞（AM）的获取与培养 大鼠股动脉放血处死，在无菌条件下进行肺灌洗，收集灌洗液，细胞纯化后调整浓度为1×109 L-1。按实验设计分成：（1）阴性对照组（生理盐水）。（2）SiO2组，含SiO2200μg#12539;ml-1。（3）Na2SeO3组，内含SiO2200μg#12539;ml-1外，Na2SeO3设05、10、20μmol#12539;L-1 3个浓度。（4）MgSO4组，内含SiO2200μg#12539;ml-1外，MgSO4设05、10、20μmol#12539;L-1 3个浓度。 （5）Na2SeO3与MgSO4联合应用组，内含SiO2200μg#12539;ml-1外，Na2SeO3与MgSO4各按上述3种剂量采用正交表L9(34)的设计，共9个剂量组。均于37℃、5%CO2培养箱培养18 h后检测各指标。 　　122 检测指标 MDA、H2O2、CAT均采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，操作方法严格按照说明书进行。 　　13 统计学处理实验数据应用SAS82软件进行完全随机设计资料方差分析及正交实验设计方差分析。 　　2 结果 　　21 Na2SeO3单独作用对染尘AM MDA、H2O2和CAT水平的影响 SiO2粉尘组AM中MDA及H2O2含量增加，CAT的活性降低，与阴性对照组比较，具有统计学意义(Plt; 005)。不同剂量Na2SeO3单独作用后MDA及H2O2含量下降，CAT活性有所增高，其中以加入的20μmol#12539;L-1 Na2SeO3组的效果最明显。见表1。 　　表1 Na2SeO3单独作用18 h后染尘AM中MDA、H2O2含量和CAT活性的变化（略） 　　注：A组为200mg#12539;L-1 SiO2;B组为200mg#12539;L-1 SiO2+05μmol#12539;L-1 Na2SeO3;C组为200mg#12539;L-1