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端粒酶在面突外胚间充质细胞干细胞中表达 　 作者：邓蔓菁 金岩 史俊南 董蕊 何大为 【关键词】 外胚间充质干细胞 　　Expression of human telomerase in ectomesenchymal stem cells of early embryonic facial process 　　【Abstract】 AIM: To evaluate the activity of telomerase in ectomesenchymal stem cells of early embryonic facial process. METHODS: Ectomesenchymal stem cells of early human embryonic facial process were isolated and cultured in undifferentiated conditions by supplementing with leukemia inhibitor factor (LIF). Immunohistochemistry assay and image analysis were used to detect the expression extent of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) when cells were passaged for 1, 8, 15 and 22 times. Cells without LIF for 10 days were also evaluated. RESULTS: Ectomesenchymal stem cells expressed hTERT. The expression extent of hTERT decreased with the increasing times of passages. The differentiated cells didn’t express hTERT. CONCLUSION: Though ectomesenchymal stem cells of early embryonic facial process have somewhat high telomerase activity, the telomerase activity at this level is not enough to prevent cells from senescence. 　　【Keywords】 ectomesenchymal stem cell； human telomerase reverse transcriptase 　　【摘要】 目的： 探讨面突外胚间充质干细胞的端粒酶活性状况. 方法： 体外培养妊娠50 d人胚胎面突外胚间充质干细胞，白血病抑制因子（LIF）抑制细胞分化，于第1, 8, 15和第22代免疫组化检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达并进行图像分析，同时检测无LIF抑制下，第5代细胞自发分化10 d端粒酶逆转录酶的表达情况. 结果： 外胚间充质干细胞表达端粒酶逆转录酶，表达强度随传代次数的增多而下降. 在分化状态，该细胞不再表达端粒酶逆转录酶. 结论： 早期胚胎面突外胚间充质干细胞具有较高的端粒酶活性，但不足以抑制该细胞的衰老. 　　【关键词】 外胚间充质干细胞； 端粒酶逆转录酶 　　0引言 　　端粒酶在胚胎干细胞、生殖细胞、永生化细胞及大部分肿瘤细胞中表达，但在正常体细胞中一般不表达. 近来发现胎儿组织、正常人的骨髓干细胞等也不同程度地表达端粒酶［1-3］. 这表明更广泛的组织细胞可能存在端粒酶活性. 为了解面突外胚间充质干细胞作为多种终末细胞的来源细胞［4,5］，端粒酶是否有活性，表达的端粒酶是否可以阻止衰老的发生，我们通过检测与端粒酶高度相关的端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)的表达，获取面突外胚间充质干细胞端粒酶表达的信息. 　　1材料和方法 　　1.1材料DMEM（低糖）/F12培养基、胎牛血清(FBS)、非必须氨基酸（NEAA）(Gibco, USA)；白血病抑制因子（leukemia inhibitor factor， LIF）（Chemicon, USA）；抗HNK1 mAb, 抗hTERT多抗(Santa Cruz Bio，USA)；抗波形丝蛋白mAb（Vimentin）, LSAB免疫组化检测试剂盒（DAKO, USA）. 　　1.2方法① 面突外胚间充质干细胞的培养和鉴定： 50 d因外伤流产自愿捐赠的胚胎，切取上下颌突，分切为1