类风湿关节炎患者外周血Th细胞亚群变化及依那西普调节作用.doc

类风湿关节炎患者外周血Th细胞亚群变化及依那西普调节作用 　【摘要】 目的: 观察活动期类风湿关节炎(RA)患者外周血中辅助性T细胞亚群(Th1、 Th2和Th17)数量和比例的变化, 探讨依那西普治疗对Th亚群的作用。方法: 选择20例活动期中重度RA患者, 随机分为依那西普加MTX联合治疗组、MTX治疗组, 于治疗前后分离PBMC, 采用流式细胞术(FCM)检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1/Th2比值, 同步用ELISA测定培养上清中IFNγ、IL4、IL17水平, 与同期选择的健康对照组比较并与患者的病情活动指标进行相关性分析。结果: 治疗前活动期RA患者PBMC中IFNγ+Th1细胞的量、IL17+Th17细胞的量及平均荧光强度、 Th1/Th2比值均高于健康对照组［(27.0±2.9)% vs (23.2±1.7)%, Plt;0.05; (36.78±2.6)% vs (2.35±0.9)%及(26.61±2.6) vs (11.4±1.2), Plt;0.01; (12.8±1.6) vs (8.60±1.9), Plt;0.01］; 依那西普加MTX联合治疗12周后, RA患者的病情改善, IFNγ+Th1细 胞、Th1/Th2比值、IL17+Th17细胞的量及平均荧光强度、培养上清中IL17水平均低于治疗前, 而与健康对照组相比无统计学意义(Pgt;0.05), 且联合治疗组降低的幅度均大于MTX治疗组; 治疗前后Th17细胞的量与C反应蛋白(CRP)、 疾病活动指数(DAS28)的消长呈正相关(Plt;0.05, r=0.38和Plt;0.05, r=0.42)。结论: IL17+Th17细胞、 IFNγ+Th1细胞及Th1/Th2比值的增高可能参与活动期RA的发病机制, 依那西普治疗可改善RA病情并下调Th1和Th17细胞亚群。 【关键词】 关节炎 类风湿 流式细胞术 依那西普 Th亚群 Th17细胞 依那西普(etanercept)是II型肿瘤坏死因子(tumer necrosis factor, TNF)受体P75的细胞外部分和人IgG1的Fc段基因工程融合的蛋白二聚体(rhTNFR: Fc), 可特异性阻断TNFα与其细胞表面受体的相互作用, 实验证实抗TNFα治疗可明显改善类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者的病情［1］。TNFα除了在RA免疫发病及炎症过程中发挥重要作用外, 尚促进IL2、 集落刺激因子(colonystimulating factor, CSF)和INFα等细胞因子的产生, 增加高亲和力IL2受体的表达, 促进T细胞增殖［2］, 推测抑制TNFα可能对T细胞及其亚群有下调作用。本研究中分离依那西普治疗前后RA患者及健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC), 用细胞内细胞因子染色流式细胞术(FCM)测定Th1、 Th2及Th17细胞的表达和ELISA法测定培养上清中相应的细胞因子水平并与患者病情进行相关性分析, 旨在探讨依那西普治疗RA对Th细胞亚群的影响, 进一步探讨此疗法的免疫机制。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　依那西普冻干粉针剂(etanercept, 商品名益赛普) 由上海中信国健药业有限公司生产。PerCP小鼠抗人CD4单克隆抗体(mAb)IgG1、FITC抗人IFNγmAb IgG1/PE抗人IL4 mAb IgG1及同型对照IgG1、Cytofix/ Cytoperm液及Perm/Wash液、流式细胞仪均购自美国BD公 司。FITC抗人IL17mAb IgG1及同型对照IgG1购自美国Ebioscience公司。淋巴细胞分离液购自天津TBD生物技术发展中心。佛波酯(phorbol 12myristate13acetate, PMA)、 离子霉素(Ionomycin)、 莫能菌素(Monensin)购自美国Sigma公司, RPMI1640培养液购自美国Gibco公司。抗人IL4 ELISA试剂盒、 抗人IFNγ ELISA试剂盒购于美国Ramp;D公司。抗人IL17 ELISA试剂盒购于美国Ebioscience公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 RA患者的分组及处理方法 　　20例RA患者(男6例, 女14例, 年龄25～67岁, 平均42岁), 为200611/200705在西京医院门诊或住院RA 患者, 均符合美国风湿病协会(ACR)1987年RA分类标准, 病程为2～20年(平均9年)。20例患者均为活动期中重度患者,