糖皮质激素瘤内注射治疗婴幼儿血管瘤机理探究.docVIP

糖皮质激素瘤内注射治疗婴幼儿血管瘤机理探究 　【摘要】 目的：探讨糖皮质激素治疗婴幼儿血管瘤的机理. 方法：对50例不同组别血管瘤（治疗显效组18例，无效组17例，未治疗组15例）及16例正常皮肤标本进行：①凋亡研究：光镜及透射电镜下观察组织形态学变化；TUNEL法检测血管内皮细胞（VEC）的凋亡水平；IHC法检测凋亡调控基因bcl2, cmyc的表达；②增殖水平研究：IHC法检测PCNA. 结果：①组织形态学变化：光镜下各组均无明显炎症及坏死征象，透射电镜观察显效组有较多VEC凋亡征象. ②VEC增殖及凋亡：显效组VEC的凋亡水平显著高于无效组、未治疗组及正常皮肤组（TUNEL： 47.86±3.14， 22.05±3.93， 19.20±2.82， 35.51±3.81， Plt;0.01）， 而增殖水平明显低于上述三组（PCNA： 10.25±3.89， 44.33±5.01， 56.32±4.12， 17.91±3.76， Plt;0.01）. ③凋亡调控情况：显效组bcl2表达显著低于无效组和未治疗组（21.28±4.70， 49.96±5.33， 52.51±7.69， Plt;0.01）；cmyc表达也明显低于后两组（25.20±5.01， 51.81±5.68， 56.28±6.92， Plt;0.01）. 结论：① 糖皮质激素可能通过诱导VEC凋亡及抑制其增殖而促进血管瘤消退. ② 糖皮质激素对VEC凋亡的影响可能与其下调bcl2和cmyc的表达水平有关. 【关键词】 血管瘤, 血管内皮细胞；糖皮质激素；增殖, 凋亡 　　0引言 　　血管瘤（不包括血管畸形）是小儿最常见的肿瘤，绝大多数为良性［1］. 糖皮质激素治疗是目前公认的首选方法［2-3］. 但其治疗机理目前并不十分清楚，且在临床上，仍有部分血管瘤疗效不明显. 本文通过检测血管瘤血管内皮细胞（vascular endothelia cell，VEC）的增殖、凋亡以及凋亡调控指标，结合光镜及电镜下组织形态学变化，初步探讨激素治疗血管瘤的机理，为提高临床疗效提供思路. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　199906/200405手术切除的草莓状血管瘤标本50例及正常皮肤标本16例，血管瘤标本取自4月到2岁患者，其中未治疗组15例，治疗显效组18例，无效组17例，男女比例为1∶2. 原位细胞凋亡检测试剂盒（宝灵曼公司）；鼠抗人PCNA单克隆抗体（福州迈新生物技术开发公司）；cmyc及bcl2试剂盒（福州迈新公司）；SP试剂盒（北京中山生物技术有限公司）. 　　1.2方法 　　1.2.1免疫组化染色用过氧化物酶抗过氧化物酶法检测 　　VEC的增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）水平及cmyc和bcl2的表达水平. PCNA，cmyc以胞核染色棕色者为阳性，而bcl2以胞浆中见棕色颗粒者为阳性. 光镜400倍下不同视野随机观察300个VEC，计阳性细胞数，然后计算每100个细胞中阳性细胞数，记为阳性表达率(positive rate). 1.2.2凋亡细胞的原位检测 　　采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的带荧光的dUTP缺口末端标记法（TdTmediated dUTP nick end labeling, TUENL），原位标记凋亡细胞核中的DNA片段3′OH末端，显示未治疗组、治疗显效组和治疗无效组及正常对照组VEC的凋亡. 检测方法按宝灵曼公司试剂盒说明书进行，以PBS代替生物素化的dUTP作为阴性对照. 光镜400倍下不同视野随机观察300个VEC，均以胞核染色棕色者为阳性，计阳性细胞数，然后计算每100个细胞中阳性细胞数，即凋亡指数. 　　1.2.3光镜下组织形态学标本进行常规H.E染色后，光学显微镜下观察其组织学特点、VEC增殖情况及血管壁结构完整性. 　　1.2.4透射电镜观察显效组1例(6 mo，女)细胞超微结构变化常规无菌术切除血管瘤瘤体，修去脂肪组织后切成小块，用2.5 g/L戊二醛固定，按常规方法制备半薄切片、超薄切片，H600型透射电子显微镜观察、摄片. 取同龄小儿择期手术中所弃正常皮肤作为对照. 　　统计学处理：计量资料用x±s表示，组间均数比较经SAS统计软件进行方差分析和q检验，Plt;0.01为有统计学意义. 　　2结果 　　2.1光镜下组织形态学与正常皮肤组相比，显效组18例血管瘤在镜下以脂肪组织及少量纤维组织为主，VEC无明显增殖现象，未见明显淋巴细胞浸润、血管壁塌陷、管腔堵塞及VEC脱落等组织结构破坏征象；未治疗组15例以及无效组17例在镜下以大量增生的血管为主，VEC增殖活跃,未见前述组织结构破坏征象（图1A~D）. 　　2.2透