紫外分光光度法测定云南红豆杉枝叶中总黄酮含量.doc

紫外分光光度法测定云南红豆杉枝叶中总黄酮含量 　 作者：孔繁晟 严春艳 贲永光 李坤平 罗佳波 【摘要】 　　目的建立云南红豆杉枝叶中总黄酮含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法，检测波长为272 nm。结果总黄酮检测浓度在12～28 μg/ml（r=0.999 2）范围内与吸光度线性关系良好，平均加样回收率为96.04%，RSD为2.7%。结论该方法用于云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量测定，方法稳定，结果准确、可靠。 【关键词】 紫外分光光度法； 红豆杉； 总黄酮 　　Abstract:ObjectiveTo establish a method for the determination of total flavonoids in branches and leaves of Taxus yunnanensis．MethodsThe assay was performed by spectrophotometric method with a wavelength at 272 nm．ResultsThe linear detection concentration range of total flavonoids was in the range of 12～28 μg/ml（r = 0.999 2），average recovery was 96.04%，RSD=2.7%．ConclusionThe method is accurate，reliable and stable and it can be used for the determination of total flavonoids in branches and leaves of Taxus Yunnanensis. 　　Key words:Ultraviolet spectrophotometry； Taxus； Total flavonoids 　　红豆杉(Taxus)属裸子植物紫杉纲红豆杉科(Taxaceae)的常绿乔木，共11种，分布于北半球，我国有4种和1个变种［1］。紫杉属植物中含有的主要抗癌活性成分是以紫杉醇为主的二萜类化合物。随着研究的不断深入，黄酮类化合物也显示出了良好的抗癌效果［2，3］。据报道，红豆杉中也有着多种黄酮类成分［4，5］，故研究红豆杉中的黄酮类成分对保护稀有树种红豆杉，提高其资源利用率有着积极意义，但有关红豆杉总黄酮含量测定目前尚未见准确报道。本研究用紫外分光光度法对红豆杉中的总黄酮进行测定，并进行了方法学的考察，以期为红豆杉中黄酮类化合物的开发和利用提供科学依据。 　　1 仪器与试药 　　Agilent 1100高效液相色谱仪；HP UV-8453型可见紫外分光光度计；Sartorius Cp3245型天平；KQ-500DE型医用数控超声仪；DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱；LABOROTA 4000旋转蒸发仪，LG 10-2.4A离心机。 　　金松双黄酮对照品（自制，HPLC纯度gt;95%）；甲醇为色谱纯。其余试剂均为分析纯。药材为云南红豆杉（Taxus yunnanensis Cheng et L.K.Fu）的枝叶采自云南大理云龙县，经南方医科大学生药学教研室鉴定。 　　2 方法与结果 　　2.1 对照品溶液的配制 金松双黄酮为红豆杉中生理活性较好的黄酮类成分，故以此作为总黄酮测定中的对照品较具有代表性。精密称取干燥至恒重的金松双黄酮2 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇30 ml，超声振荡使溶解，放冷至室温，甲醇定容至刻度，摇匀，得浓度为40 μg/ml的对照品储备液。 　　2.2 供试品溶液的配制 准确称取红豆杉药材粉末1 g，加石油醚25 ml，超声提取30 min，抽滤，重复提取1次, 滤液弃去。药渣挥干石油醚残液, 加甲醇25 ml，超声提取30 min，抽滤，重复两次，滤液合并浓缩, 置10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。 　　2.3 最大吸收波长的选择取对照品溶液和提取溶液进行波长扫描（图1～2），对照品与供试品溶液在272 nm附近处吸收较强，故选择272 nm作为测定波长。 　　图1 对照品紫外扫描光谱（略） 　　图2 提取液紫外扫描光谱（略） 　　2.4 标准曲线的绘制 精密量取金松双黄酮对照品溶液0.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml, 分别置于10 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度。用紫外-可见分光光度计于272 nm处测定吸光度值, 以吸光度(A)对浓度(C)进行线性回归，得回归方程： 　　C=1.55+29.16A，r=0.999 2，在12～28 μg/ml范围内线性关系良好。 　　2.5 精密度实验 取金松双黄酮对照品溶液5 ml 5份，在