细胞复合β-磷酸三钙生物陶瓷修复软骨缺损实验探究.docVIP

细胞复合β-磷酸三钙生物陶瓷修复软骨缺损实验探究 　【摘要】 通过将骨髓间充质干细胞（MCSc）诱导的具有软骨细胞、成骨细胞表型的细胞接种到三维多孔β－磷酸三钙(β-TCP) 生物陶瓷支架材料上，体外构建骨软骨复合体，探讨以β-TCP 为载体建造组织工程化软骨修复骨软骨缺损的可行性。［方法］将β-TCP 多孔陶瓷加工成圆柱状，并将其作为构建人工软骨的细胞支架。在支架材料上分别接种从犬骨髓干细胞培养成的具有软骨细胞、成骨细胞表型的细胞，将细胞-支架复合体共同培养1周后，移植到犬关节软骨缺损处。植入后12、16周末取材，进行大体观察、组织学及组织化学等观察。［结果］复合体体内移植后，在犬关节软骨缺损处有新生软骨形成，形成的软骨基本保持了支架材料原有形态。［结论］β-TCP 多孔陶瓷可作为支架材料，复合细胞后具有修复软骨缺损的作用。 【关键词】 组织工程 生物陶瓷 软骨修复 软骨细胞 成骨细胞 Abstract ［Objective］To evaluate the feasibility of repairing cartilage defect with tissue-engineered cartilage ,which was made of chondrocytes and osteoblast seeded onto a biodegradable porous bioceramic β-tricalcium phosphate (β-TCP)［Method］ A porous bioceramic template of β-TCP was created in the shape of a circular cylinder Chondrocytes and osteoblasts induced from dog bone marrow stem cells were seeded onto the β-TCP and then kept them growing together for 1 week prior to transplantation into the cartilage defects After 12 , 16 weeks ,the specimens were harvested and examined macroscopically, histologically and immunohistochemically ［Result］ Gross morphological and histological analysis of the specimens from the β-TCP complex demonstrated new cartilage construction The result was better than that in control group ［Conclusion］ These findings suggest that porous bioceramic (β-TCP) is a good“matrix”for chondrocytes and osteoblasts, and can be used for cartilage engineering Key words：tissue engineering;bioceramic;repair of cartilage;chondrocyte; osteoblast 关节软骨损伤是骨科临床的常见疾病，软骨损伤的修复一直是关节外科的一个难题。20世纪80年代以来，组织工程技术的迅速发展，为这一难题的解决提供了一种可行性的方法［1］。作者采用软骨组织工程技术，体外分离骨髓间充质干细胞（MCSc）为种子细胞，将其诱导为成骨细胞和软骨细胞，与β-磷酸三钙多孔陶瓷（β-TCP）复合培养后，移植到犬关节软骨缺损处，通过组织学及组织化学等观察，以了解和评估其软骨修复性能。 1材料和方法 11材料及仪器 （1）DMEM 培养基等试剂为Gibco 公司产品。（2）β-TCP 多孔陶瓷材料:由上海贝奥路生物材料有限公司提供。材料平均孔径为400~600 μm,孔隙率为75%±10%，气孔沟通率达100%。 12方法 121MSCs的提取及诱导培养 自比格犬股骨大转子下穿刺抽取约7 ml骨髓，Percoll分离法分离骨髓间充质干细胞，用含10%胎牛血清和青霉素及链霉素的L-DMEM培养液在37 ℃、5%CO2、 95%相对湿度的培养箱中培养。4 d后分别换含软骨细胞诱导因子、成骨细胞诱导因子的条件培养液继续培养。成骨细胞诱导因子的组成：地塞米松10nmol／L，β-甘油磷酸钠10