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细胞外ATP对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复影响 　 作者：钱军，马延超，夏亚一，汉华，孙正义 【摘要】 目的 研究细胞外ATP对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响。方法 健康成年Wistar大鼠20只，雌雄不限，体重280-320g，平均300g，制作成脊髓打击伤动物模型，并随机分为两组：A组(ATP组)和B组(对照组)，每组10只。伤后1、3、7、14、28d用改良的Tarlov 评分、斜板试验观察大鼠运动功能的恢复情况。 结果 大鼠脊髓损伤后A组改良的Tarlov 评分、斜板试验优于对照组，在14d和28d，改良的Tarlov 评分、斜板试验A组明显优于B组(Plt;0.05)。结论 细胞外ATP能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复。 【关键词】 脊髓损伤；ATP；运动功能；大鼠 脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)时机体历经原发性损伤和继发性损伤的序贯过程，造成不同程度的神经元和胶质细胞的坏死、凋亡，轴突的断裂、脱髓鞘，临床表现为损伤平面以下不同程度的感觉、运动和大小便功能障碍。脊髓损伤后功能恢复的核心机制被认为是启动了潜伏的突触和神经环路以及残存的神经元轴突侧支发芽，并和靶细胞形成新突触，从而实现神经环路的结构重组[1]。因此，脊髓损伤后，提高神经元的存活质量，促进神经元轴突的生长是恢复脊髓功能的关键。ATP作为一种价格低廉、安全性高的传统能量物质，对神经系统的作用已经引起了国内外学者们的重视。最近的研究表明，细胞外ATP具有保护脊髓神经元的作用，并能促进外周神经再生轴突生长、成熟[2]。对于细胞外ATP对脊髓损伤后运动功能恢复的影响，未见文献报道，本文通过行为学检查，观察细胞外ATP对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物分组 　　健康成年Wistar大鼠(兰州大学实验动物中心提供)20只，雌雄不限，体重280-320g，平均300g，制作成脊髓打击伤动物模型，并随机分为两组：A组(ATP组)和B组(对照组)，每组10只。 　　1.2 脊髓损伤动物模型的制作方法 　　用100g/L(10%)水合氯醛腹腔注射麻醉，俯卧位固定，取后正中切口，显露椎板及棘突，明确T10棘突后咬除T9-11棘突、T10全部椎板和T9、T11上、下各半个椎板，Allen 法用自制打击器制作脊髓打击伤动物模型，打击强度为30gcf，造模成功后，逐层缝合切口。造模成功的标志：在Allen 装置撞击脊髓的瞬间，动物身体抖动，双下肢迅速发生回缩及弹动动作，尾巴痉挛性摇动，表明撞击成功。术后大鼠自由进食、饮水，控制室温在18-22℃，定时清洁笼具，每天挤压膀胱排尿2-3 次，直至膀胱功能恢复。 　　1.3 给药方法 　　A组动物在打击完成后，经暴露的硬脊膜注射ATP(5mg/kg)至硬脊膜下损伤周围组织，缝合伤口后即经腹腔注射ATP(40mg/kg)，以后每天经腹腔注射同等剂量的ATP 1次；B组动物注射方法同A组，给予等量的生理盐水作为对照治疗。 　　1.4 行为学检查 　　A、B两组动物分别于伤后1、3、7、14、28d行改良的Tarlov 评分、斜板试验，对大鼠进行行为及肢体运动功能检测，观察伤后各时相点大鼠后肢活动、肌力等，以此评定ATP处理前后大鼠运动功能的恢复情况。①改良的Tarlov 评分：0分，没有自主性运动；1 分，仅限于髋、膝关节的非反射性运动；2分，肢体髋、膝、踝3个主要关节的运动；3分，能主动支持体重和不协调步态，或偶尔出现协调步态；4分，前肢和后肢协调的步态，行走时有趾间关节的运动；5分，正常步态[3]。②斜板实验：采用Rivlin法[4]，将大鼠放置于一长方形木制斜板上，上面垫一橡胶垫，斜板可旋转测量斜板角度。将大鼠身体纵轴与斜板纵轴平行放置，大鼠头朝斜板抬高侧，以再抬高5°时大鼠能停留5s的最大角度为测定值，每只动物测5次，取其平均值作为测定值。 　　1.5 统计学分析 　　所有数据均以±s表示，应用SPSS12.0软件进行统计分析，组内比较采用单因素方差分析，LSD 法进行两两比较；组间比较采用两样本的t检验，以Plt;0.05表示差异有统计学意义。 　　2 结 果 　　两组大鼠脊髓损伤后1d改良的Tarlov 评分、斜板试验最低，3d后开始升高，7-14d升高较快，A组大鼠损伤后14d改良的Tarlov评分、斜板试验明显高于损伤后7d(P均小于0.01)，B组大鼠损伤后14d改良的Tarlov评分也明显高于损伤后7d(Plt;0.05)，两组大鼠改良的Tarlov 评分、斜板试验均在损伤后28d达到高峰。损伤后1、3、7d两组大鼠改良的Tarlov评分、斜板试验无明显差别，A 组和B 组大鼠都表现为双后肢不同程度的瘫痪。在损伤后14d和28d，改良的Tarlov 评