第四章 植物组培外植体-黄秀梅.pptVIP

复习题： 培养基的成分包括哪几类？各有何作用？ 在培养基成分中什么决定着外植体发育方向？ 抗生素的作用是什么？ 配制MS培养基时，琼脂和蔗糖的加入量一般为多少？ 无论是离体培养繁殖种苗，或者是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质，或特殊的基因型。对材料的选择要有明确的目的，具有一定的代表性，提高成功机率，增加其实用价值。 1、生长健壮 在生长健壮的无病虫的植株上，选取发育正常的器官或组织。 原因：代谢旺盛再生能力强（比较容易培养成功）。 2、不同部位 ：靠近植株的近基部比较易成功。 植物的生长季节（生长最适季节） 植物的生长发育阶段。 材料太大:易污染，也不需要； 材料太小:多形成愈伤组织，甚至难于成活。 一般选取培养材料的大小，在0.5cm--1.0cm。 如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。 茎尖分生组织：1-2个叶原基，0.2-0.3mm 叶片、花瓣：5mm2 茎段：0.5cm 沿植物主轴越向上的部分所形成的器官其生长的时间越短，生理年龄越老，越接近发育上的成熟，越易形成花器官，反之相反。 一、外植体的处理 植物材料一般采取的预处理方法是，先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。经过预处理的植物材料，其表面仍有很多细菌和真菌，因此还需进一步灭菌。 二、外植体常规灭菌过程 ①把材料放进70%的酒精中约30s。 ②用0.1%的升汞（HgCl2）中浸泡10min。 或用10%的漂白粉上清液中浸10min～ 15min。 ③无菌蒸馏水冲洗3～5次。 ④灭菌时进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好 的接触。 ⑤在灭菌剂里滴入数滴0.1%的Tween20（吐温） 或Tween80湿润剂，则灭菌效果更好。 2．操作期间 在打开培养瓶、三角瓶或试管时，最大的污染危险是管口边沿沾染的微生物落入管内，解决这个问题，可在打开前用火焰烧瓶口。如果培养液接触了瓶口，则瓶口要烧到足够的热度，以杀死存在的细菌。为避免灰尘污染瓶口，可用纸包扎瓶口和塞子，以遮 盖瓶子颈部和试管口，相对地减少污染机会。 4．工具用后及时消毒 工具用后及时消毒，避免交叉污染。 工作人员的呼吸也是污染的主要途径。通常在平静呼吸时细菌是很少的，但是谈话或咳嗽时细菌便增多，因此操作过程应禁止不必要的谈话并戴上口罩。 5．空气中有灰尘 由于空气中有灰尘，因此在操作时，仍要注意避免灰尘的落入。尽量把盖子盖好，当打开瓶子或试管时，应拿成斜角，以免灰尘落入瓶中。刀、剪、镊等用具，一般在使用前浸泡在95%酒精中，用时在火焰上消毒，待冷却后使用。每次使用前均需进行用具消毒。 第四节 外植体的培养条件 通常对愈伤组织的诱导，在黑暗条件下有利，在有光条件下培养的愈伤组织质地和颜色也有不同。 分化器官需要光照，并随着芽苗的生长需要加强光照。 普通培养室要求每日光照12h-16h，光照强度1000lx- 5000lx。 第四节 外植体的培养条件 第四节 外植体的培养条件 组织培养中的湿度影响主要有两个方面： 一是培养容器内的湿度：它的湿度条件常可保证100%。 二是培养室的湿度：它的湿度变化随季节和天气而有很大变动。 湿度过低：会造成培养基失水而干枯，或渗透压升高，影响培养物的生长和分化。 湿度过高：会造成杂菌滋长，导致大量污染。因此，要求室内保持70%-80%的相对湿度。 第四节 外植体的培养条件 污染：是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。 污染的原因： 从病源菌方面来分析主要有： 细菌：菌斑呈粘液状物，而且在接种后1-2天即可发现。 真菌：污染部分长有不同颜色的霉菌，在接种后3-10天才能发现 从污染的途径而言主要是： 外植体带菌 培养基及器皿灭菌不彻底、 操作人员未遵守操作规程等。 第六节 外植体的褐变及其预防措施 褐变——是指外植体在培养过程，自身组织从表面向培养基释放出褐色物质，以致培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。 第六节 外植体的褐变及其预防措施 二、污染的预防措施 常用灭菌方法 第一节 外植体的选择 第二节 外植体的消毒 第三节 外植体的接种 第四节 外植体培养条件 第五节 污染原因和预防措施 第六节 外植体的褐变及其预防措施 * ？ 第四章 植物组培外植体基本知识 植物组培流程 ★ 植物组培快繁步骤 外植体选择 第一节 外植体的选择 第二节 外植体的消毒 第三节 外植体的接种 第四节 外植体培养条件 第五节 污染原因和预防措施 第六节 外植体的褐变及其预防措施 第一节 外植体的选择 第一节 外植体