罗格列酮对人乳腺癌MDAMB231细胞体外抗肿瘤作用.docVIP

罗格列酮对人乳腺癌MDAMB231细胞体外抗肿瘤作用 　 作者：章涛 余华荣 杨贵忠 刘颖菊 杨俊卿 蒋建新 周岐新 论文代写 【摘要】 　　目的： 研究 过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞MDAMB231体外生长 影响 ，以评价其在人乳腺癌 治疗 上的 应用 潜力. 方法 ：噻唑蓝(MTT)法检测罗格列酮对MDAMB231细胞体外生长抑制作用；应用PPARγ拮抗剂GW9662， 分析 罗格列酮对MDAMB231细胞增殖影响与PPARγ受体关系；流式细胞仪分析细胞周期，Annexin VFITC和TUNEL法检测细胞凋亡. 结果：罗格列酮干预下MDAMB231细胞G0/G1期比例上升，而S期比例下降，呈量效关系抑制其生长，IC50=5.2 μmol/L. PPARγ拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮对MDAMB231细胞增殖抑制作用（Plt;0.05）；100 μmol/L罗格列酮还可诱导MDAMB231细胞凋亡，TUNEL法检测的凋亡率(18.4±3.1)%与Annexin VFITC法检测的结果一致［(16.6±2.7)%］（Pgt;0.05）. 结论：罗格列酮通过PPARγ介导，使MDAMB231细胞G1期阻滞而抑制其增殖，高浓度时还可诱导其发生凋亡，罗格列酮有望成为治疗乳腺癌的有效药物. 【关键词】 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 罗格列酮 抗肿瘤药 乳腺肿瘤 MDAMB231细胞 毕业论文 0引言 毕业论文 由罗格列酮、吡格列酮和环格列酮等组成的噻唑烷二酮类（thiazolidinedione，TZD）人工合成过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferatoractivated receptor γ，PPARγ)激动剂已被广泛应用于糖尿病的临床治疗当中［1］.近年来的研究显示，TZD等PPARγ激动剂可抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进其凋亡，激活PPARγ受体极有希望成为治疗多种恶性肿瘤的新途径［2］.但 目前 为止，尚无罗格列酮对人MDAMB231乳腺癌细胞体外抗肿瘤的系统研究报道.鉴于此，我们就细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡等方面探讨罗格列酮对MDAMB231细胞的体外生物学效应，为未来临床抗肿瘤应用提供 理论 依据. 论文代写 1材料和方法 1.1材料MDAMB231人乳腺癌细胞株购自中科院上海细胞库.罗格列酮购自重庆康尔威药业公司（批号:20051，纯度gt;0.99）；四甲基偶氮唑蓝（MTT）、PPARγ受体拮抗剂GW9662购自Sigma公司； TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒购自南京凯基生物；Annexin VFITC Kit为Beckman Coulter公司产品；RPMI1640培养基、小牛血清购自HyClone公司；其它试剂均为分析纯. Coulter counter细胞计数仪（Beckman Coulter 公司）；Safire全波长酶标仪（TECAN 公司）；FACS Calibur流式细胞仪（BectonDickinson公司）.由于罗格列酮和GW9662难溶于水，用DMSO制成0.1 mol/L的母液，-20℃冰箱保存备用. 论文代写 1.2方法 1.2.1细胞培养MDAMB231细胞培养于含100 mL/L小牛血清的RPMI 1640培养基中，常规加入青霉素（105 U/L）与链霉素（100 mg/L），于37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养. 论文代写 1.2.2MTT检测细胞增殖抑制率取对数生长期的MDAMB231细胞，计数并调整密度为1.2×108/L，以每孔100 μL接种于96孔板中培养，15 h后更换培养基，设置对照组和不同浓度药物组（罗格列酮1×10-8，1×10-7，1×10-6，1×10-5，1×10-4 mol/L），每组设8个复孔.继续培养24 h后，加入10 μL MTT（5 g/L），继续孵育4 h，弃上清，每孔加入100 μL DMSO，振荡10 min待结晶溶解，于酶标仪上测定570 nm波长的A值， 计算 不同浓度罗格列酮对MDAMB231细胞的生长抑制率：细胞抑制率（%）=［1－试验组A570 nm/对照组A570 nm］×100％.将药物浓度的对数值和抑制率拟合后计算出IC50.试验重复3次. 毕业论文 1.2.3细胞增殖能力检测取对数生长期细胞，细胞计数并调整密度为5×107/ L，以每孔1 mL接种于6孔板中培养.第2日更换含不同药物组合的新鲜培养基，包括1 mL/L DMSO, 1 μmol/L罗格列酮、5 μmol/L GW9662以及1