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美洲大蠊提取物对实验性肝纤维化影响 　作者：李武，段丽芳，何贵清，沈志强，杨海秋，梁燕萍 【摘要】 　　目的探讨美洲大蠊提取物对四氯化碳（CCl4）所致实验性肝纤维化的影响。方法采用CCl4复制小鼠肝纤维化模型，同时用0.25 g/kg的美洲大蠊提取物灌胃治疗，测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA)，Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ), IV型胶原(IV-C)，层粘蛋白(LN)，并以光镜现察肝脏组织学改变，进行炎症活动度分级及肝纤维化分期。结果美洲大蠊提取物有降低ALT，AST的作用，并显能著降低HA，LN，PCⅢ和Ⅳ-C。经治疗后的肝胜细胞变性、坏死及纤维组织增生明显减少。结论美洲大蠊提取物具有抗实验性肝纤维化的作用。 【关键词】 美洲大蠊提取物； 肝纤维化； 四氯化碳； 小鼠 昆虫作为一类新的医药资源宝库，越来越受到国内外学者的重视。近年研究表明，美洲大蠊提取物（Abstract of Periplaneta americana，APA）对实验性肝损伤有较好的保护作用，能抑制雏鸭体内鸭乙型肝炎病毒的复制［1］。但对肝纤维化是否有作用，目前未见报道。为探讨APA对肝纤维化的防治效果，本研究用CCl4复制小鼠肝纤维化模型，初步观察APA对肝纤维化影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物健康雄性昆明种小鼠40只，胎龄3～4周，体质量18～22 g，由昆明医学院动物科提供，实验过程中饲养条件相同，而且定期清洁,消毒。 　　1.2 试剂CCl4，分析纯，由天津化学试剂三厂生产，批号：080618。橄榄油，化学纯，由上海国药集团化学试剂有限公司提供，批号： 透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、IV型胶原(Ⅳ-C)、 肝纤维化放免试剂盒由北京北方生物技术研究所提供，批号：081020。Masson试剂盒由福州迈新生物有限公司提供，批号：811048003。 　　1.3 主要药物APA原药，为昆明赛诺制药有限公司提供，批号用蒸馏水配制成浓度为1.25 %的混悬液。临用时用力摇匀。动物用量均按生药量计算。秋水仙碱（购自云南植物药业有限公司，批号1 mg溶于100 ml蒸馏水中，冰箱保存备用。 　　2 方法 　　2.1 动物模型的制备20%CCl4橄榄油溶液按0.05 ml/10 g体质量给小鼠颈背部皮下注射，2次/周，连续6周。 　　2.2 动物分组40只小鼠随机分成4组，10只/组，即正常对照组、模型组、APA治疗组、秋水仙碱对照组。正常对照组动物仅皮下注射橄榄油溶液；模型组和药物实验组动物皮下注射20%CCl4橄榄油溶液（0.05 ml/10 g体质量），2次/周, 连续6周。造模当日即开始灌胃给予药物或蒸馏水，1次/d，连续6周，直至动物处死：空白对照组及模型组动物按0.2 ml/10 g体质量灌胃蒸馏水；秋水仙碱组：按0.1 ml/10g体重灌胃，用量为0.1 mg/kg；APA治疗组：给1.25%原药0.2 ml/10g体质量灌胃（0.25 g/kg，相当于临床60kg成人每日用量的25倍）。 　　2.3 观测指标与标本采集实验过程中观察动物的体质量、食欲、神态等一般状况。分别于实验开始后的第6周末剖杀动物，采集血液和肝脏标本。剖杀前24 h禁食不禁水，剖杀时先以乙醚吸入麻醉后摘眼球用毛细玻管眼眶取血供生化检测，再立即剖杀动物，取肝左叶中部、左叶及右上叶前部，进行组织病理检查。采用放免法（按试剂盒说明书进行）测定血清HA, LN，PC-Ⅲ，Ⅳ-C水平。采用全自动生化分析仪测定ALT，AST，TBiL和ALb。 　　2.4 病理组织学检查肝组织行石蜡包埋，常规切片，HE及Masson染色，光镜下观察肝组织学改变及胶原纤维增生情况，按照《病毒性肝炎防治方案》的标准［2］，进行炎症活动度分级及肝纤维化分期。有两期以上肝纤维化形成，即确定肝纤维化模型复制成功。 　　2.5 统计方法采用SPSS13.0统计软件分析数据，实验所得数据用±s表示，组间两两比较采用q检验，等级资料用秩和检验。 α=0.05作为显著性检验标准。Plt; 0.05，结果有统计学意义。 　　3 结果 　　3.1 小鼠一般情况空白对照组处死前均存活，模型组实验中死亡1只，合计死亡1只。死亡者未列入统计。 　　3.2 APA对实验性肝纤维化小鼠肝功能的影响APA治疗组及秋水仙碱组转氨酶的升高均明显低于模型组，且APA治疗组的降酶作用优于秋水仙碱组。模型组与药物组之间的ALB及TB无显著性差异见表1。表1 APA对实验性肝纤维化小鼠肝功能的影响(略) 　　　3.3 APA对实验小鼠肝纤维化指标的影响APA组及秋水仙碱组血清中的HA、