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肿节风药材中反丁烯二酸提取工艺探究 　 作者：陈磊 李远 赵中流 田薇 【摘要】 　　目的以肿节风药材为原料，并用RP-HPLC(反相高效液相色谱)外标法进行含量测定。方法在单因素试验的基础上，选取提取溶剂、提取方法和提取液pH值这3个因素进行了3因素2水平的正交试验，进而筛选出最优的水平组合。结果提取肿节风药材中反丁烯二酸的最佳提取工艺是：提取液pH值为4.0；提取方法为微波提取5.0 min；提取溶剂为70％乙醇溶液。结论实验结果为确定肿节风药材中反丁烯二酸提取工艺提供了实验依据。 【关键词】 肿节风 提取工艺 反丁烯二酸 正交实验 　　Abstract：ObjectiveTo determine the content of the fumaric acid which was extracted from Herba Sarcandrae by RPHPLC.MethodsOn the basis of the single factor experiment, three factors were chosen with orthogonal design: extraction solvent,extraction method, PH value, then the optimal combinations of levels was defined. ResultsThe results showed that the optimal combinations of levels of extracted fumaric acid from Herba Sarcandrae were extracted with 70% ethanol and microwave irradiation for 5 minutes, and the pH value was 4.0. ConclusionThe result provides a technology for the extraction of fumaric acid from Herba Sarcandrae. 　　Key words：Herba sarcandrae; Extraction; Fumaric acid; Orthogonal test 　　肿节风Herba Sarcandrae (英)为2005版《中国药典》第Ⅰ部收载品种，为金粟兰科Chloranthaceae植物草珊瑚Sarcandra glabra (Thunberg) Nakai的干燥全株［1］。现代药理和毒理研究表明肿节风具有抗菌消炎、抑制流感病毒、抗肿瘤、促进骨折愈合及镇痛等多种活性［2～4］。其中，有机酸类成分反丁烯二酸具有抗菌消炎的药理活性［5］。目前，在质量控制上针对肿节风药材的含量测定指标共有3个。即异秦皮啶、反丁烯二酸和总黄酮［5］。这些化学成分(或有效部位) 已经药理实验证明具有一定的抗菌、消炎、止痛或抗肿瘤活性。资料表明，《中国药典》和部颁标准中肿节风药材及其制剂的质量控制指标多为单一成分。此外，已有的研究资料表明,对肿节风及其制剂化学成分的定性定量分析虽有较多报道，但单独针对肿节风药材中的反丁烯二酸提取工艺进行研究的尚未见报道。因此，通过不同工艺方法来提取肿节风药材中的反丁烯二酸，并应用HPLC法测定其含量，然后分析不同方法对含量测定结果的影响，进而确定最佳提取工艺，可以为肿节风药材质量控制提供依据。 　　1 器材 　　肿节风药材，市售（浙江省临安市益寿堂药店），产于长江以南各省；95%乙醇，丙酮均为分析纯（衢州巨化试剂有限公司），甲醇为一级色谱纯（天津市四友精细化学品有限公司），乙腈为特级色谱纯（天津市四友精细化学品有限公司）；对照品为反丁烯二酸（≥99％），含量测定专用；Waters515高效液相色谱仪，包括2695四元数码泵，2420蒸发光闪射（紫外）检测器，EMPOWER2 色谱管理系统等；精密分析天平（FA2104N）；无级可调台式超声清洗器（SK8200HP）；微波提取设备（NJ107-3）等。 　　2 方法 　　2.1 样品中反丁烯二酸的含量测定 　　2.1.1 色谱条件［6］ 　　色谱柱为C18对称柱（4.6 mm×250 mm)；流动相为0.08％磷酸乙腈（9:1,V/V）；流速0.6 ml/min；柱温为室温；检测波长220 nm。 　　2.1.2 样品溶液的制备准确称取0.15g肿节风药材粉末加75%乙醇30 ml，置50 ml锥形瓶中 →（加浓HCl, 调节pH值） → 冷浸8～9 h → 提取 → 抽滤 → 恒温水浴中，浓缩蒸干 → 加甲醇（色谱纯）溶解，转移至10 ml容量瓶，定容 → 0.45 μm微孔滤膜过滤 → 即得样品溶