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胃黏膜活检真菌检测方法及临床病理诊断分析 　　[中图分类号] R446.8 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）11（b）-0015-03 　胃内真菌感染是指胃内常见的念珠菌、毛霉菌、曲霉菌等感染引起的黏膜炎症，其中最常见的是真菌性溃疡和溃疡型胃癌伴真菌感染。胃黏膜真菌感染并不少见，往往被忽视。近年来，胃黏膜真菌感染时有报道[1-3]，呈逐年上升趋势。真菌性胃溃疡酷似溃疡型胃癌，溃疡巨大，坏死层增厚，纤维胃镜下很难对其鉴别诊断，临床医师经常误诊为胃癌[4-5]。病因控制和抗酸治疗后，溃疡久治不愈[6]，形成难治性胃溃疡。究其原因，是消化科医师和病理科医师对难治性胃溃疡病因重视不够，忽视了真菌感染这一重要因素。本文探讨胃黏膜常规石蜡切片、HE染色及特殊染色在真菌检测中的意义和显微镜下真菌的形态。 　1 真菌检测方法及意义 　1.1 切片HE染色光镜观察（常规染色） 　胃黏膜真菌感染多在黏膜表面的渗出层或坏死层，背景污秽，难以辨认，尤其是毛霉菌和曲霉菌的菌丝往往被误认为坏死脱落物质。只有念珠菌因其粗大的假菌丝和芽生孢子容易检出。另外，活检标本小、含真菌量少、一些真菌在HE染色切片中本身不易着色，这都是真菌漏检的原因。因此，单单依靠HE染色诊断真菌感染是不够的。 　1.2 PAS染色光镜观察（特殊染色） 　PAS染色法对真菌着色有一定特异性，切片中真菌鲜亮，是理想的真菌染色方法之一。真菌菌丝壁着红色，菌丝不完整，呈节段性[7]。芽生孢子红色，二端钝圆，横切面呈球形，有明显折光性。 　1.3 Giemsa染色光镜观察（特殊染色） 　当HE、PAS染色后，病理医师镜检仍不能确认是否有真菌感染时，Giemsa染色可以作为一种有效的补充染色。Giemsa染色对真菌着色清晰，菌丝和芽生孢子均呈蓝色。 　2 真菌组织切片形态 　2.1 念珠菌 　在组织切片中，念珠菌主要位于黏膜表面的渗出及坏死组织内，HE染色尚能辨认芽生孢子和假菌丝（图1）。芽生孢子在10times;40倍视野下可见两种形态：一种是较大的孢子，球形或略呈卵圆形，体积相当于中性粒细胞分叶核的一个片段，直径3～5 mu;m，苏木素浓染，染色细腻；另一种芽生孢子形态较小，圆形，紫红色，直径2～3 mu;m，中心可见淡染折光性强的空染区。在10times;100倍光镜下，芽生孢子清晰，厚膜，中心可见淡染小泡。假菌丝由芽管延长形成，细而直，像一根透明胶管，有分隔，少部分有分枝。HE染色切片呈浅蓝色。孢子和假菌丝PAS染色呈鲜亮的玫瑰红色（图2），Giemsa染色呈天蓝色。 　2.2 毛霉菌 　HE染色切片中，毛霉菌比念珠菌粗大，长短不一，壁厚，直径为5～6 mu;m，多数情况下为10～15 mu;m，菌丝无隔，如形成皱褶，易误认为分隔，分支少而不规则。毛霉菌的特征性结构除无隔的大菌丝外，还能形成孢子囊，但HE染色切片很少见。毛霉菌HE染色呈浅蓝色，比细胞核着色略浅，易辨认。PAS染色切片呈玫瑰红色（图3），Giemsa染色粗大菌丝蓝染。 　2.3 曲霉菌 　HE染色切片，曲霉菌菌丝粗细均匀，直径为2～7 mu;m，有隔，淡蓝色，有时着色较浅，不易辨认。曲霉菌菌丝易变形，可呈小球或小囊状，聚集成群生长，也可散在生长，呈深蓝色，易被误认为是球菌。PAS染色清晰可辨（图4），菌丝呈红色，小球或小囊呈紫红色；Giemsa染色呈蓝色。 　3 胃黏膜真菌感染的意义 　3.1 重视真菌感染 　真菌广泛存在于自然界，是主要的条件致病感染菌之一。机体抵抗力下降或胃黏膜屏障作用减弱时[8]，均可引起胃黏膜真菌感染。胃黏膜真菌感染尤以慢性消化性溃疡多见，表面污浊，边缘不整；纤维胃镜下可见溃疡扩大、加深，溃疡面凹凸不平，表面污秽厚苔，周围黏膜结节状隆起，组织松脆易出血，为其典型特征，与溃疡型胃癌的形态表现颇为相似[9]，X线甚至胃镜肉眼检查会误认为癌，因而在胃黏膜活检病理诊断时，须警惕真菌感染[10]。真菌感染的诊断目前仍然根据病理检查，在病灶内找到真菌菌丝[11]。采用方法主要为HE、PAS、Giemsa染色。单独依靠HE染色易造成漏诊。对胃溃疡病临床医师除考虑消化性胃溃疡和胃癌外，应高度重视真菌性胃溃疡的存在，减少误诊率。 　3.2 胃溃疡与真菌的关系 　胃黏膜真菌感染是否与胃溃疡有关，取决于胃黏膜上皮的完整性。胃黏膜始终处于细胞凋亡与增殖的动态平衡中。当真菌感染时，可能诱发胃黏膜上皮细胞过度增殖和凋亡，当凋亡的数目大于增殖的数目，增殖细胞又不能及时弥补凋亡细胞时，会导致溃疡形成[12]。胃溃疡形成后，缺损的黏膜层保护屏障不完整，局部免疫力下降，真菌进入胃内后，在溃疡渗出及坏死物中生长、繁殖。此时，真菌的代谢产物和酶加速溃疡的发展，使溃疡进一步扩大、加深，增加了出血及胃