胶陀螺中麦角甾醇结构修饰及抗结核作用探究.doc

胶陀螺中麦角甾醇结构修饰及抗结核作用探究 　 作者：魏丹丹，许琼明，孙晓飞 【摘要】 目的研究麦角甾醇及类似物7-脱氢胆甾醇氧化后的抗结核作用。方法从胶陀螺中分离得到麦角甾醇，对其氧化得到麦角甾醇过氧化物;并对麦角甾醇类似物7-脱氢胆甾醇进行氧化得7-脱氢胆甾醇过氧化物;用MTT法检测其氧化产物的抗结核活性。结果麦角甾醇过氧化物及其类似物的过氧化物当浓度分别超过20，50 μg/ml时有抗结核活性。结论麦角甾醇过氧化物及7-脱氢胆甾醇过氧化物具有一定的抗结核活性。 【关键词】 麦角甾醇; 过氧化物; 抗结核 　　Abstract：ObjectiveTo study the antituberculous activity of oxidative products of Ergosterol and 7-dehydrodesmosterol.MethodsErgosterol was separated from Bulgaria inquinants and oxygenized ;its analogue 7-dehydrodesmosterol was also oxygenized. The antituberculous activity of oxygenized products were detected using MTT method.Results The oxidative products had antituberculous activity when concentration of Ergosterol peroxide exceeded 20 μg/ml and the 7-dehydrodesmosterol peroxide exceeded 50 μg/ml.ConclusionThe oxidative products has invariably antituberculous activity. 　　Key words：Ergosterol; Peroxidate; Antitubercle 　　胶陀螺Bulgaria inquinants (Pers Fr)，又名拱嘴蘑、胶鼓菌等，为子囊菌纲胶陀螺科胶陀螺属真菌，分布于我国东北长白山区，历代本草未见其有关药用记载。此菌有毒[1]，处理不当食用或食用过多后会出现日光过敏性皮炎型症状[2，3]。杨晓静等[4]发现胶陀螺可以明显抑制动物EAC艾氏腹水及H22肝癌腹水的细胞生长，且使死细胞数明显增加，表明其具有一定的抗肿瘤作用。 　　结核病(tuberculosis)是由结核杆菌引起的一种慢性传染病，可侵及许多脏器，以肺部受累形成肺结核最为常见。我国的结核病耐药情况十分突出，耐药率高达46%，被世界卫生组织列入特别引起警示的国家和地区之一;部分病人由于对化疗药物过敏、耐药或有毒副作用，不能使用化疗药物或化疗药物对其失去作用[5]，而天然药物则可迅速改善结核患者的临床症状，提高疗效，缩短疗程，拮抗化疗毒副作用[6]。有文献报道[7]，从植物及海洋生物中提取的二萜类化合物、色胺酮及其类似物、香豆素类等天然活性成分也具有抗结核作用，国外学者Akihisa T从食用蘑菇Hypsizigus marmoreus中分出麦角甾醇等一系列甾醇化合物，并证明它们几乎都具有良好的抗结核杆菌和抗EB病毒的活性[8]。 　　本实验从胶陀螺中提取得到麦角甾醇，对其氧化得到麦角甾醇过氧化物，并对麦角甾醇类似物7-脱氢胆甾醇进行氧化得7-脱氢胆甾醇过氧化物;并用MTT法检测氧化产物的抗结核活性。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器 旋转蒸发器(RE-52A，上海亚荣生化仪器厂);循环水式真空泵(SHZ-DA，巩义市英峪华仪器厂);电热恒温鼓风干燥箱(GZX-GF-9023-BS，上海博泰实验设备有限公司);显微熔点测定仪(XT-5，北京科仪电光仪器厂);超导核磁共振谱仪(UNITY-INOVA 300，美国瓦里安公司);质谱仪(TOF-MS，英国 Micromass公司)。 　　1.2 材料胶陀螺购于延吉市长白山特产品经营部;7-脱氢胆甾醇(纯度97%，Sigma公司);柱层析硅胶和薄层层析硅胶G(80-120目)均为青岛海洋化工有限公司产品;显色剂：10%磷钼酸乙醇溶液;化学试剂均为分析纯，由国药集团化学试剂有限公司提供。Middlebrook7H9培养基干粉和营养添加剂(OADC)均购自美国BD公司;应用液为含10%OADC 的Middlebrook7H9液体培养基;受试菌株：结核分枝杆菌标准株H37Rv，来自国家菌种保藏中心;DMSO购自国药公司。 　　2 方法与结果 　　2.1 提取与分离胶陀螺干燥子实体4.60 kg， 70%乙醇溶液回流提取3次，每