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脐血CD34+细胞体外扩增时HOXB4基因表达变化 　 作者：唐宇宏，费小明，沈文怡，缪扣荣，崔毓桂，汪承亚 【摘要】 同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC)的自我更新和增殖能力。本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上检测HOXB4基因的表达，以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平。结果显示：随着体外培养时间的延长，虽然CD34+细胞数增加，但HOXB4表达下降；周后，HOXB4几乎检测不到，与成熟外周血淋巴细胞表达HOXB4的水平相同；CD34+细胞与骨髓间充质干细胞(BM-MSC)共培养可以减缓CD34+细胞 HOXB4表达的下降。结论：脐血CD34+细胞体外扩增过程中自我更新能力逐渐下降。CD34+与BM-MSC共培养有助于减缓体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的丧失。 【关键词】 脐血CD34+细胞 　　Expression of HOXB4 in Cord Blood Progenitor Cells Expanded in vitro 　　Abstract HOXB4，a member of homeobox gene family，is closely related to the self-renewing and proliferative ability of primitive hematopoietic stem/progenitor cells(PHSC/PHPC). This study was aimed to investigate the self-renewing level of cord blood progenitor cells (CBPC) expanded in vitro. The HOXB4 expression at mRNA level was assayed by using real time RT-PCR. The results indicated that as culture prolonged，the total cells，CD34+ cells greatly increased，however the HOXB4 expression gradually declined，even down to undetectable level similar to that of mature lymphocytes. Meanwhile，it was shown that CD34+ cells co-cultured with bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) could abate the decline of HOXB4 expression. It is concluded that the self-renewing potential of CD34+ cells gradually decreased during expansion in vitro， co-culture with BM-MSC was helpful to CD34+ cell expansion and slowed the loss trend of its self-renewal. 　　Key words HOXB4；cord blood CD34+ cells；ex vivo expansion；bone marrow mesenchymal stem cell；real time RT-PCR 脐血是造血干细胞(HSC)的重要来源，但脐血量有限，单份脐血HSC往往不能满足成年患者移植的需要。因此，许多人致力于体外扩增脐血造血干/祖细胞(CBSC/CBPC)的研究。既往研究表明，FL、TPO、SCF等可以促使原始造血祖细胞增殖，经2周的培养，CD34+细胞数量增加近百倍［1-3］。我们先前采用骨髓间充质干细胞(BM-MSC)共培养，CD34+细胞比值增加更为明显［4］，但对于体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的水平并不清楚。 最近发现同源盒基因家族成员HOXB4作为一类转录因子，可正性调节HSC的自我更新 ［5-7］。HOXB4在原始造血干细胞（PHSC）上高表达，随着PHSC向各系分化，表达水平逐渐降低，直至消失［8］。因此认为：HOXB4表达强弱能够作为一种衡量CD34+细胞自我更新能力的标志。本研究以实时定量RT-PCR的方法检测HOXB4的表达，探讨造血因子刺激的单纯培养及以BM-MSC为基质的体外扩增CD34+细胞能否维持其自我更新的能力。 　　材料和方法 　　主要仪器和试剂 　　Tripure Reagent (Roche，Ger