黄瓜CAO基因的克隆和功能验证（赵冰）.DOCVIP

中国农业大学 本科生“URP”立项申请书 项目名称 黄瓜CAO基因的克隆和功能验证 申 请 人 赵冰 工作单位 园艺学院 联系电话 010 电子信箱 zhaobing@ wanggongle2016@163.com (推荐) 填表日期 2017年3月28日 中国农业大学教务处制 项目名称 黄瓜CAO基因的克隆和功能验证 项目起止时间 2017.4-2018.4 项目申请人情况 姓名 赵冰 性别 男 出生日期 1969.4 最后学历与学位 博士 专业技术职务 副教授 从事专业 蔬菜学 项目概况 黄瓜在我国始终是人们喜食的一种大众化蔬菜，据FAO统计，2013年，中国黄瓜栽培面积就达116万公顷，占全世界的54.97%，其中产量占全世界的54.97%。据统计，黄瓜也是日光温室中栽培最普遍的蔬菜，其栽培面积约占温室总面积的70%以上，每年元月份温室里的黄瓜就开始上市，合理调控温室环境，可以实现黄瓜的周年供应。 在温室栽培过程中，由于其棚膜的限制，弱光逆境尤为突出，在弱光胁迫下，植株会出现叶色变淡、弱光下叶绿素a/b降低、根系生长受到抑制，总生物量严重下降等不良现象。目前黄瓜温室专用品种比较单一，且大多采用自交、杂交等传统的选育方式，采用转基因技术提高黄瓜对弱光胁迫的抗性至关重要。 叶绿素是高等植物光合作用必不可少的色素。查阅资料可知，叶绿素b在蓝紫光（在遮光的条件下，以蓝紫光为主的散光占比增加）处的吸收峰要高于叶绿素a；叶绿素b的增加可以提高捕光色素复合体（LHC蛋白）的稳定性，对叶绿体基粒数及基粒片层数目的增加有重要作用；叶绿素a/b可作为植物利用弱光能力的判断指标，调节叶绿素a/b的比值主要通过“叶绿素循环”实现。因此提高叶绿素b的有利于光能的吸收和传递，缓解弱光的危害。脱植基叶绿素a加氧酶是目前可知的唯一能使叶绿素a转化成叶绿素b的酶，该酶被CAO基因编码，该基因有四个不同的功能区域，该酶在具有催化功能的同时，还可通过调节CAO的稳定性来防止叶绿素b的过量积累(Nagata et al. 2004)。目前CAO基因已在藻类、拟南芥、水稻中相继得到了分离和鉴定，在拟南芥上过表达AtCAO基因可以提高叶绿素a和叶绿素b的含量，提高整个叶绿素合成的活性，提高捕光蛋白复合体组分的蛋白丰度、调节光系统的比例(Ting jia .2016)；过表达AtCAO基因可以提高烟草等的光合速率，增加二氧化碳的同化作用(Ajaya K.2012)；水稻上OsCAO1基因的破坏会直接影响到水稻的产量和质量。据此推测，推测黄瓜CAO基因对提高植物的光能捕获能力，提高作物和产量具有重要作用。 在黄瓜数据库中可查知预测的黄瓜CsCAO基因，本研究将从黄瓜的cDNA序列中克隆得到CsCAO基因的编码序列，构建过表达载体，在拟南芥中过表达该基因，对其进行表达分析和功能验证。 二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法) 学生在教师指导下阅读文献，最后撰写结题报告，多方面学生创新力，具体实施方案如下： 文献查找与阅读 项目参加者首先阅读本课题组近年来发表的相关文章，同时学会引用关键词以及相关技术搜索到相关文献并进行阅读，深入分析文章的思路并根据项目撰写试验方案。 该环节让学生初步接触专业文献，结合查找以及阅读文献的能力，调动学生对专业研究方向的兴趣。 考核办法：学生根据项目研究目的自拟一份实验方案及技术路线交给指导教师，由老师考核评分。 试验环节 CsCAO基因的CDS（基因编码区）全长的克隆 用紫外分光光度剂测定RNA的纯度和浓度用紫外分光光度剂测定NA的浓度CsCAO基因的环节将很好地培养学生独立完成实验的能力，可以学会思考如何把理论知识运用到实际操作中，同时在小组成员分工合作的过程中培养团队意识，在试验过程中提高动手能力，在试验结果分析时训练独立思考能力。 考核办法：小组成员上交阶段性的试验心得和工作报告，指导教师也将定时让学生做进展报告，通过与学生交谈，了解实验过程中遇到的问题，解答疑问，在此基础上对学生进行考核评定。结题验收 试验结束后，学生结合整理好的试验结果，按规定时间独立完成科研论文或书面总结及相应的项目研究成果，同时总结实验过程中的经验教训，并提出有根据的改进意见。 该环节主要培养学生实验分析、撰写总结等方面的能力。 考核办法：指导教师根据学生上交的书面材料考核评分。 项目实施的基础和条件 四、学生提交的成果 1、提交相关研究报告1份； 2、提交试验过程与结果的相关图片及数据资料1份； 3、提交PPT汇报材料，并完成验收。 五、经费预算 （盖章）