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沙门菌检测

阳性反应为培养基不改变颜色,而培养基变黄色者为阴性反应。 阳性管因培养初期发酵葡萄糖产酸变黄,继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱,所以黄色变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色 4、赖氨酸脱羧酶试验 对接种环或接种针灭菌时,应在酒精灯火焰上由下端往上烧起。 用接种针穿刺接种时,应垂直生化鉴定管中的培养基平面,并从中央插入。 所有生化试验挑取的菌落都应来自同一单个菌落。 TSI试验时是联合采用穿刺接种与划线接种的方法进行操作。 靛基质试验时,加入靛基质试剂的量要适宜。 准确的生化反应可作出初步鉴定,必要时应配合形态及染色检查, 以排除肠球菌和其他肠道菌。 做好个人防护工作,实验完毕后废弃物不能乱扔,防止细菌污染。 注意事项 七、结果报告及分析 1、菌落形态观察 3、综合检验结果 2、生化反应结果 选择性 分离平板 来源于 MM增菌液 来源于 SC增菌液 BS平板 SS平板 1、菌落形态观察结果记录格式 观察BS和SS平板上菌落的生长状况,并如实记录在下表1中。 结果的报告 表1 菌落形态观察结果 2、生化试验的结果记录格式 观察4项主要生化试验的结果,并如实记录在下表2中。 试管 编号 TSI试验 靛基质 试验 尿素酶 试验 赖氨酸脱羧酶试验 1 2 3 对照管 结果报告 表2 生化试验结果 3、综合结果 实验报告书写格式 一、实验目的和要求 二、实验原理 三、检验程序 四、材料和器材 五、实验方法和步骤 六、结果报告及分析 食品中沙门菌的检验 Inspection of Salmonella in food 6学时,3次课 食品中含有微生物生存和繁殖的各种营养成分和矿物质,可在食品中生存的微生物种类多、分布广、繁殖快,微生物所产生的各种有害物质可引起食品的腐败、变质,危害食用者身体健康,甚至发生食物中毒。 沙门菌是引起食物中毒的常见病原菌,本实验以沙门菌为例讲解食品中微生物检验的主要步骤和方法。 一、相关理论知识回顾 沙门菌的概况 沙门菌分布 沙门菌的生物学特性 沙门菌为革兰氏阴性肠道杆菌。需氧兼性厌氧菌,在10℃~43℃内均能生长,但以35℃~43 ℃为最适生长温度。一般沙门菌在40℃~43℃培养能提高阳性检出率,而伤寒沙门菌在37℃培养阳性检出率最高。 沙门菌广泛存在于自然界中,常可在家畜、家禽、飞鸟及鼠类等动物体中发现。鸡是沙门菌最大的储存宿主。 沙门菌不分解乳糖(亚利桑那菌除外),分解葡萄糖可产酸产气(但伤寒沙门菌产酸不产气)。多数沙门菌产生H2S(但甲型副伤寒沙门菌H2S为阴性),不产生靛基质、乙酰甲基甲醇,不液化明胶,不分解尿素,多数能利用枸橼酸盐,能还原硝酸盐为亚硝酸盐,在氰化钾培养基上不生长。 二、实验目的和要求 1、熟悉食品标本的采集原则。 2、掌握沙门菌检验的主要步骤与方法。 3、掌握沙门菌落的观察和生化反应结果的判断。 三、实验原理 检验原理:主要依据细菌特殊的生物学特征。 沙门菌不分解乳糖(亚利桑那菌除外),分解葡萄糖可产酸产气(但伤寒沙门菌产酸不产气)。多数沙门菌产生H2S(但甲型副伤寒沙门菌H2S为阴性),不产生靛基质、乙酰甲基甲醇,不液化明胶,不分解尿素,多数能利用枸橼酸盐,能还原硝酸盐为亚硝酸盐,在氰化钾培养基上不生长。 沙门菌的检验程序 GB 4789.4—2010 前增菌 增菌 分离 生化实验 血清学鉴定 四、材料和仪器 1、材料: 可疑食物(奶粉); 生理盐水,氯化镁孔雀绿增菌液(MM),亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC),SS琼脂培养基(志沙琼脂培养基) ,亚硫酸铋琼脂培养基(BS),三糖铁琼脂培养基(TSI),缓冲蛋白胨水(BPW),靛基质试剂,尿素琼脂(pH7.2)培养基,赖氨酸脱羧酶试验微量生化鉴定管等。 2、仪器: 灭菌平皿、锥形瓶、烧杯、玻棒、量筒、吸管、滴管、接种环、接种针、高压灭菌器、37℃和42℃恒温培养箱等。 25g(或25ml)+225ml 生理盐水稀释液;制备检样匀液 可疑食品标本均质 各取1ml,分别接种到9mlMM、SC增菌液中 报告检验结果 分离平板上菌落形态观察 从以上增菌液中挑取适量培养物,划线涂布到SS、BS平板上 4项主要 生化反应 MM增菌42℃,18~24h 第 一 次 课 第 二 次 课 分离培养 37 ℃ 18~24h 第 三 次 课 37 ℃,18~24h SC增菌37 ℃,18~24h 本次课的安排 1、增菌培养: 2、配制分离培养基: ①亚硫酸铋琼脂培养基(BS) ②SS琼脂培养基(志沙琼脂培养基 ) 3、倾注无菌平板 第一次 一、本次课的任务 9ml 无菌

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