酸枣仁药材的HPLC 指纹图谱.docVIP

酸枣仁药材的HPLC 指纹图谱　 文献出处：河北师范大学学报/ 自然科学版/第33 卷/ 第3 期/2009 年5 月　　 作者：戎欣玉1 , 　刘　魁2 , 　李　勇1 , 　梁晓丽1 , 　程彦超1　 作者单位： 1. 河北科技大学化学与制药工程学院;　 2. 河北科技大学理学院,　　 药材来源：　　 10 个批次的酸枣仁药材(购于市场)　　　 表1 　不同产地的酸枣仁药材　　 编号　　　 产地/加工厂　　 采摘期　 炮制方法　　 购买地点　　 1　 河北邢台　 2006年10月　　 清炒　 石家庄乐仁堂药店　　　 2　　　 河北邢台　　　 2007年10月　　 清炒　　　 石家庄乐仁堂药店　　 3　　 河北邢台/ 河北祁新中药颗粒饮片有限公司　　 2007 年10 月　 清炒　 石家庄康贝龙药店　　　 4　　　 安国祁澳中药饮片有限公司　 2007年10　　　 月清　　 炒石家庄康贝龙药店　　　 5　 河北邢台　　 2006年10月　　 生　　 石家庄安国中药材市场　　 6　　 山西　　　 2006年10月　 生　　 石家庄安国中药材市场　 7　 陕西　　 2006年10月　　 生　　 石家庄安国中药材市场　 8　 甘肃　　 2006年10月　　　 生　　　 石家庄安国中药材市场　　 9　　　 山东　　　 2007年10月　　　 熟　　 石家庄百姓康药店　　 10　　 河北邢台/哈尔滨加工　 2007年10月　　 熟　　 石家庄安国中药材市场　 方法与结果：　　 1.色谱条件：色谱柱:Cromasil2C18 分析柱(4. 6 mm ×250 mm ,5μm) ,流动相:φ= 0. 1 %的磷酸水溶液2乙腈,采用梯度洗脱,运行时间112 min ,梯度洗脱程序见表2. 检测器:SPD2M20A 二极管阵列检测器,流速:0. 8 mL/ min ,柱温:35 ℃,进样量:5μL ,理论塔板数按酸枣仁皂苷A 计算不小于20 000.　　　 2.对照品溶液的制备：酸枣仁皂苷A 对照品溶液制备:精密称取酸枣仁皂苷A 对照品7. 6 mg ,置10 mL 容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,制成0. 76 g/ L 的溶液、摇匀、备用.橙皮苷对照品溶液的制备:精密称取橙皮苷对照品5. 0 mg ,置于5 mL 容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,制成1. 0 g/ L 的溶液、摇匀、备用.　 3.供试品溶液的制备：将酸枣仁粉碎后过筛孔为0. 45μm 的标准筛,70 ℃下干燥. 精密称取10 g ,用滤纸包裹,放入索氏提取器;加入100 mL 馏分为60～90 ℃石油醚,加入沸石,加热回流提取至无色为止. 挥尽药渣中的石油醚,干燥完全后,再加入90mL 二氯甲烷,加热回流提取至无色为止. 挥尽药渣中的二氯甲烷,干燥完全后,加入80 mL 75 %的甲醇,在90 ℃下加热回流提取3 h. 所得提取液用旋转蒸发仪浓缩后,用300 mL 正丁醇的水饱和溶液分3 次萃取,每次萃取都要经充分振摇并静置0. 5 h 后分离,将3 次萃取的正丁醇的水饱和溶液合并后,再用300 mL 5 %的氢氧化钾分2次萃取正丁醇的水饱和溶液,每次萃取都要经充分振摇并静置0. 5 h 后分离,弃去下层碱液,将正丁醇溶液用旋转蒸发仪浓缩,将浓缩液放在已恒重的蒸发皿中水浴蒸干,在真空干燥箱中80 ℃减压干燥,即得酸枣仁浸膏干膏,称重. 将浸膏干膏置于10 mL 容量瓶中,用甲醇溶解,充分震摇后,用甲醇定容. 用离心机(2 000 r/min) 离心5 min ,上层液用微孔滤膜过滤,备用(相当于1 mL 含原药材1 g) .　 4.检测波长的确定：精密量取酸枣仁皂苷A 对照品溶液0. 6 mL ,用甲醇定容于2 mL ,以试剂空白为参比,在190～250 nm波长范围内进行扫描,酸枣仁皂苷A 在204 nm 处有最大吸收.精密量取橙皮苷溶液1. 0 mL ,用甲醇定容于2 mL ,以试剂空白为参比,在190～250 nm 波长范围内进　　 行扫描,橙皮苷在204 ,225 ,280 nm 处均有较强的吸收.综合考虑酸枣仁皂苷A 和橙皮苷的最大吸收波长,确定检测波长是204 nm.　　　 方法学考察：　　　 1.精密度试验：取编号为3 的酸枣仁药材,按2. 3 方法制成供试品溶液,连续进样5 次,每次5μL. 结果表明:各共有峰的相对保留时间RSD 值在0. 303 %～1. 380 %之间,各共有峰相对峰面积RSD 值在0. 224 %～1. 212 %之间,RSD 值均小于10 % ,表明方法的精密度良好.　 2.重复性实验：取编号为3 的酸枣仁药材5 份,按2. 3 方法分别制成供试品溶液,分别测定. 结果表明:各共有峰的相对保留时间RSD 值在0. 002 %