中药川芎指纹图谱的相似性研究-中山大学化学学院-sunyat-sen.docVIP

中药川芎指纹图谱的相似性研究 叶润仪 甘峰* 中山大学化学与化学工程学院分析化学研究所 摘要 本研究工作对中药川芎的指纹图谱进行了研究，试图发现可以对中药指纹图谱相似性进行评价的方法。我们以四川，广东和江西三个产地的川芎为分析对象，参照文献运用高效液相色谱法对其进行分析，在同一实验条件下得到了30个川芎指纹图谱：15个共有峰的保留时间-峰面积数据（每产地10个）。并运用化学计量学上的向量余弦法、相似系数法和主成分分析发对它们进行相似性分析。结果表明，三个分析方法都能成功地区分三个产地的川芎，但是难以给显著性差异定下明确指标，也难以评价同一产地的川芎指纹内在的一致性。 关键词 中药指纹图谱 川芎 相似度分析 HPLC 1 前言 1.1 中药指纹图谱 国外关于植物药色谱指纹图谱的研究论文日渐增多。他们提出的色谱指纹图鉴别，目的是解决成分复杂、有效成分不明的草药在生产加工的检测和证明产品批间质量的稳定。美国FDA允许草药保健品申报资料可以提供色谱指纹图谱。WHO在2000年草药评价指导原则中已有规定，如在植物药的制备及成品的章节中提到，如果草药的活性成分不明，可以提供色谱指纹图谱以证明产品质量一致[1-4]。 一直以来，我国的中药研究，大多追随国外的研究方法，侧重于药用成分的发现和分离。但是，中药是协同作用的复杂体系（药效必须通过其内在多种成分相辅相成的作用才能发挥出来），这意味着简单的把当中的某种成分提取出来进行质量检测，不能达到评价其药效的目的[5]。我们需要把中药内在的信息全面地、综合地反映出来，而体现系统性、特征性和稳定性三大原则的指纹图谱正是符合了这个要求。 1.2 相似性评价方法 中药指纹图谱我们可以通过色谱等分析仪器获得。但是，如果评价不同批次的中药指纹间的差异的方法不科学，指纹图谱对中药质量控制的作用就难以发挥。本研究的目的是探究现今的广泛应用的相似性评价方法对中药指纹相似性评价时存在的问题。 目前研究中药指纹图谱常采用的方法，如投影法、向量夹角余弦（点积）法、相关系数法[8]。先做如下定义，一个中药的指纹为一个向量X（或Y），向量的元素是中药中各个成分。即或者，其中n为共有成分的数目。 1.2.1 向量余弦法 向量余弦法是根据几何学多维空间的向量夹角的启发，把两个指纹当作两个向量，计算起夹角余弦相似度： （1.1） 资助项目：中山大学化学与化学工程学院创新基金课题 编号：21 导师：甘峰 副教授 中山大学化学院分析化学研究所 Email：cesgf@zsu.edu.cn 1.2.2 简单相关系数 相关系数与变量单位无关，对各特征变量值上的大小不敏感，忽略了变量值大小之间的差异, 变量值的大小差异对特征变量的变化模式影响不大，它是测度样品间在特征变量的变化模式上相似形状的相似性，又称为形状测度，是鉴别样品真伪，提供定性信息的相似度： （1.2） 1.2.3 主成分分析 主成分分析应用一种降维的思想，把每个指纹图谱看作一个多维的向量，用线性代数的数学方法计算出每个向量在第一第二主轴上的得分，再用其做出PCA图，图上每一个点代表一个指纹图谱，从PCA点的分布状况，可以直观地分辨出各个指纹之间的异同。但这个方法也有其不足之处，再本文中有所讨论。 2 实验内容 2.1 川芎药材 本次实验的三批川芎药材从民用药房中购买，产地分别为四川，广东，江西。所得川芎药材为褐色片状，磨粉后过40目标准筛，所得样品粉末按产地分别用玻璃瓶装好，避光存放备用。 2.2 样品制备 称取0.500g川芎粉末，置于至10.0m容量瓶，用甲醇（AR，广州试剂厂）定容，35摄氏度下超声萃取18分钟。所得溶液过0.20微米滤膜，直接进样。 2.3实验仪器 Agilent（HP）1100高效液相色谱仪：四元低压梯度泵；二极管阵列检测器（中山大学中心实验室提供） 2.4 色谱条件 色谱柱： Kromsil C18 反相色谱柱，0.5*25*4.6 mm i.d 流动相： 流动相A 为0.5％乙酸水溶液（怡宝蒸馏水）；流动相B 为甲醇（分析纯） 流动梯度：0―3min 32%B ; 3－20min 32－65%B ; 20－36min 65－85%B; 36－48min 85－100%B ; 48－60min 100%B 流速： 0.8 mL/min 柱温： 30. 0℃ 观测波长：294 nm 进样量： 20μL（进样阀自动控制） 单次测量时间： 60min 2.5 实验方案 三个产地的川芎粉末分别取两次样品，每个样品连续进五针（一个实验日完成），共得到同一制备条件下的30（2×5×3）个川芎指纹图谱。 3．结果与讨论 3.1 川芎指纹图谱 3.1.1 重现性 按文献[8]报道，川芎药材的提取