牦牛生长激素全基因的克隆测序和遗传多态性研究.pdf

生命科学趋势 2004 年 4 月 第 2 卷 第 1 期 Trends in Life Sciences 牦牛生长激素全基因的克隆测序和遗传多态性研究 1 2② 2 2 欧江涛 ,钟金城 ,陈智华 ，赵益新 （1 海南农业科学院畜牧兽医研究所,海口 571100； 2 西南民族大学,成都 610041） 责任编辑：饶绍奇 马月辉 周海龙 摘要：根据普通牛和其他哺乳动物基因的碱基序列和相关文献资料设计 3 对引物, 用PCR扩增并克隆测定了牦牛的GH基因,大小为 2847bp(GenBank登录号为AY271297), 包括 5 个外显子、4 个内含子、5＇(711bp)和 3＇(505bp)侧翼区。通过 GenBank 中的 Blastn序列比较分析,牦牛 GH基因全序列与普通牛同源性为 98%,与水牛、山羊、绵羊 同源性分别为 97%、94%、93%。用 UPGMA、NJ 和 MP 等三种方法构建分子系统树的结果 均表明,牦牛与普通牛的亲缘关系最近,首先聚为一类；两物种合并后再与水牛聚为一 类；然后再同山羊和绵羊聚为一大类；最后才与红鹿聚为一类。采用 PCR-RFLP方法研 究了牦牛 GH 基因全序列的酶切位点多态性,结果在 30 头牦牛中仅有 4 头在 3′端侧翼 区存在 MspⅠ/HpaII 酶切位点多态性,表现为 BB 和 AB 型,基因型频率分别 为:0.8667,0.1333；B、A基因的频率分别为 0.9334和 0.0666,未发现AA 型。 关键词 牦牛,生长激素基因,克隆测序,多态性,分子系统树 生长激素(growth hormone,GH)是一种由垂体前叶嗜酸性细胞合成和分泌的调节脊椎 动物生长发育的重要单链多肽类激素,由 186～191 个氨基酸组成,有两个二硫键,形成稳 定的分子结构,分子量为 21000～22000Da,其与催乳素（prolactin,PRL）和胎盘催乳素 （placental lactogen,PL）同属于一个基因家族,广泛存在于各种脊椎动物中。GH 基因 由 5～6 个外显子和 4～5 个内含子组成,cDNA 一般长约 800～1200bp；不同纲动物间核酸 序列的组成、外显子和内含子的数目及大小、启动子、5′端和 3′端侧翼区存在很高的 保守性；哺乳动物内含子与外显子的交界处一般都符合 GT-AG 规则；转录起始点上游 34bp 以内有 TATA 盒,启动子含有顺式调控序列,以便对激素类信号作出反应。对各种动物 GH 基因的相关研究表明[1～6],GH 能促进动物生长发育、增加产奶产肉量、提高饲料转化效 率等。因此,可被作为用来寻找与生产性能相关性状的侯选基因。目前,功能基因克隆测 序、定位、基因多态性与生产性能的相关性和分子系统进化的研究已成为动物遗传育种 的热点之一,但对牦牛的研究相对较少。本研究对牦牛 GH 全基因进行 PCR 产物 T-A 克隆 测序、构建基因分子系统树和 PCR-RFLP 多态性分析,以期为保护和开发利用牦牛这一宝 贵的遗传资源,发展高寒少数民族地区的畜牧业经济提供理论依据。 __________________________ 基金项目:国家民委重点科研项目资助 作者简介：欧江涛 (1975),男,贵州织金人,硕士,主要研究方向:动物分子遗传 ②通讯作者 2 生 命 科 学 趋 势 第 2 卷 1.材料与方法 1.1 实验动物 在四川省红原县龙日种畜场随机选取 30 头健康成年的麦洼牦牛，颈静脉采血,置于冰 瓶内带回实验室，-20℃保存备用。 1.2 工具酶和试剂 ExTaq 聚合酶、pMD18-T Vector、IPTG、X-Gal、MspⅠ/HpaII、AluⅠ、PstⅠ和 Hinf Ⅰ等购自大连宝生物工程有限公司,产物直接纯化试剂盒、小量胶回收试剂盒和小量质粒 提取纯化试剂盒购自上海华舜生物工程公司。 1.3 DNA 的提取和检测 牦牛基因组