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利用益生菌重组研发猪瘟疫苗-家畜卫生试验所
35
家畜衛試所研報No.50 :35~42 (2016)
利用益生菌重組研發豬瘟疫苗
*
謝政橘 、邱淑君、陳瑞祥
行政院農業委員會家畜衛生試驗所
摘要 豬瘟是由豬瘟病毒 (classical swine fever virus) 所引起豬隻一種急性、亞急
性、慢性、典型及非典型的疾病過程,病毒經口、鼻等黏膜感染是其主要的感
染途徑。由於豬瘟的高傳染性和高致死性,嚴重威脅著產業發展,並造成養豬
戶巨大的經濟損失。本計畫利用益生菌所具有的免疫佐劑、吸附黏膜、抗膽汁
酸等能力,而又具備低免疫抗原性,在動物腸道有一定增殖等特點,作為表達
和傳遞病毒抗原之載體 (vector) ,設計將豬瘟病毒特異性T 細胞之抗原決定位
E290 基因送入益生菌分泌表達型載體,研發益生菌口服型疫苗。本計畫之主要
目的,冀望藉由疫苗的研發,降低該疾病所造成之經濟損失,本計畫已完成益
生菌載體模式之建立,惟應就抗體之提升再進一步研究。
關鍵詞:豬瘟病毒、疫苗、益生菌。
緒言 研發使用於C型肝炎的治療。C型肝炎患者對C型肝炎
豬瘟以出血和發熱為主要特徵,呈急性或慢性經 病毒的免疫反應微弱,為誘導產生細胞免疫反應,
過,是一種對豬危害性極大的傳染病。在世界許多國 Takei 等人[10]選定non-structural protein 3 (NS3)
家和地區,傳統疫苗接種是控制豬瘟的主要方式。目 蛋白質的CD4及CD8 之抗原決定基,製作能表現
前使用的傳統疫苗主要是兔化豬瘟疫苗,屬於一種弱 galacto-N-biose/lacto-N-biose I-binding protein
毒疫苗。1970年代後期,豬瘟的流行形式發生了很 (GLBP) 及NS3的融合蛋白質之載體,移植入比菲德
大變化,地區散發性流行及非典型豬瘟症狀的發生, 氏菌 (Bifidobacterium) ,製成能表現C型肝炎病毒的
使得豬瘟免疫屢屢失敗,因此研究和開發新型豬瘟疫 部分NS3蛋白質之基改比菲德氏菌。後經由小鼠動物
苗是非常重要的。目前,在豬瘟的免疫防治中,可利 實驗,證實細胞免疫反應指標,如IFN- γ或
用其結構蛋白Erns和E2 [11] 。之前研究人員研究豬瘟 interleukin- 12 (IL- 12) ,有顯著意義的增加。故可利
病毒多肽時發現豬瘟病毒非結構基因NS2-3編碼的 用細菌、病毒為活載體達到細胞免疫之目的,而益生
一段多肽E290 ,能誘導interferon- γ(IFN- γ) 的產 菌係屬安全無毒之菌種,且能在腸道黏膜間生存增值,
生[1] 。在細胞毒性實驗中,CSFV特異性T細胞能溶 故為一最合適的載體系統[3,5] 。
解含有該多肽的靶細胞,該多肽含有CSFV特異的毒
殺型T細胞和輔助型T細胞的抗原決定位,是研發豬瘟 材料與方法
抗原疫苗的首選。另外口服免疫的優點是可有效的刺 益生菌菌株之選擇及建立
激黏膜免疫細胞產生分泌型IgA並引起全身免疫,但口 參考先前文獻[7,12] ,選擇Lactobacillus casei
服免疫需要克服免疫保護性抗原在到達腸道黏膜之前, 及Lactobacillus plantarum ,及由豬隻篩選之菌株
在胃和腸道中被降解的可能,滿足這一要求的必須是 Lactobacillus johnsonii此三株菌株進行實驗。將菌株
活的載體系統來傳遞完整無損的抗原成分[2,6]。而在 接種於5 mL MRS液體培養基或培養皿中,於37℃厭
益生菌疫苗的應用發展上,陸續已有文獻發表。例如 : 氧環境下培養16-24小時觀察。並利用API 50 CHL
*抽印本索取作者
行政院農業委員會家畜衛生試
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