利用益生菌重组研发猪瘟疫苗-家畜卫生试验所.pdf

35 家畜衛試所研報No.50 ：35~42 (2016) 利用益生菌重組研發豬瘟疫苗 * 謝政橘 、邱淑君、陳瑞祥 行政院農業委員會家畜衛生試驗所 摘要 豬瘟是由豬瘟病毒 (classical swine fever virus) 所引起豬隻一種急性、亞急 性、慢性、典型及非典型的疾病過程，病毒經口、鼻等黏膜感染是其主要的感 染途徑。由於豬瘟的高傳染性和高致死性，嚴重威脅著產業發展，並造成養豬 戶巨大的經濟損失。本計畫利用益生菌所具有的免疫佐劑、吸附黏膜、抗膽汁 酸等能力，而又具備低免疫抗原性，在動物腸道有一定增殖等特點，作為表達 和傳遞病毒抗原之載體 (vector) ，設計將豬瘟病毒特異性T 細胞之抗原決定位 E290 基因送入益生菌分泌表達型載體，研發益生菌口服型疫苗。本計畫之主要 目的，冀望藉由疫苗的研發，降低該疾病所造成之經濟損失，本計畫已完成益 生菌載體模式之建立，惟應就抗體之提升再進一步研究。 關鍵詞：豬瘟病毒、疫苗、益生菌。 緒言 研發使用於C型肝炎的治療。C型肝炎患者對C型肝炎 豬瘟以出血和發熱為主要特徵，呈急性或慢性經 病毒的免疫反應微弱，為誘導產生細胞免疫反應， 過，是一種對豬危害性極大的傳染病。在世界許多國 Takei 等人[10]選定non-structural protein 3 (NS3) 家和地區，傳統疫苗接種是控制豬瘟的主要方式。目 蛋白質的CD4及CD8 之抗原決定基，製作能表現 前使用的傳統疫苗主要是兔化豬瘟疫苗，屬於一種弱 galacto-N-biose/lacto-N-biose I-binding protein 毒疫苗。1970年代後期，豬瘟的流行形式發生了很 (GLBP) 及NS3的融合蛋白質之載體，移植入比菲德 大變化，地區散發性流行及非典型豬瘟症狀的發生， 氏菌 (Bifidobacterium) ，製成能表現C型肝炎病毒的 使得豬瘟免疫屢屢失敗，因此研究和開發新型豬瘟疫 部分NS3蛋白質之基改比菲德氏菌。後經由小鼠動物 苗是非常重要的。目前，在豬瘟的免疫防治中，可利 實驗，證實細胞免疫反應指標，如IFN- γ或 用其結構蛋白Erns和E2 [11] 。之前研究人員研究豬瘟 interleukin- 12 (IL- 12) ，有顯著意義的增加。故可利 病毒多肽時發現豬瘟病毒非結構基因NS2-3編碼的 用細菌、病毒為活載體達到細胞免疫之目的，而益生 一段多肽E290 ，能誘導interferon- γ(IFN- γ) 的產 菌係屬安全無毒之菌種，且能在腸道黏膜間生存增值， 生[1] 。在細胞毒性實驗中，CSFV特異性T細胞能溶 故為一最合適的載體系統[3,5] 。 解含有該多肽的靶細胞，該多肽含有CSFV特異的毒 殺型T細胞和輔助型T細胞的抗原決定位，是研發豬瘟 材料與方法 抗原疫苗的首選。另外口服免疫的優點是可有效的刺 益生菌菌株之選擇及建立 激黏膜免疫細胞產生分泌型IgA並引起全身免疫，但口 參考先前文獻[7,12] ，選擇Lactobacillus casei 服免疫需要克服免疫保護性抗原在到達腸道黏膜之前， 及Lactobacillus plantarum ，及由豬隻篩選之菌株 在胃和腸道中被降解的可能，滿足這一要求的必須是 Lactobacillus johnsonii此三株菌株進行實驗。將菌株 活的載體系統來傳遞完整無損的抗原成分[2,6]。而在 接種於5 mL MRS液體培養基或培養皿中，於37℃厭 益生菌疫苗的應用發展上，陸續已有文獻發表。例如 ： 氧環境下培養16-24小時觀察。並利用API 50 CHL *抽印本索取作者 行政院農業委員會家畜衛生試