免疫犘犆犚检测微量犎5亚型禽流感病毒.pdf

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１１４２７ １０３９１０４５ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 免疫 检测微量 亚型禽流感病毒 犘犆犚 犎５ ， ， １２ １２ ２ １ ２ ２ ２ ２ 邓明俊 ，肖西志 ，吴振兴 ，张彦明 ，辛学谦 ，郑小龙 ，王 群 ，王昌军 （ 西北农林科技大学 动物医学院，杨凌 ； 山东出入境检验检疫局，青岛 ） １． ７１２１００２． ２６６００２ 摘 要：为了有效检测低浓度禽流感病毒，笔者通过将高特异性的抗原 抗体反应与高灵敏性的 扩增技术相  ＰＣＲ 　 结合，建立了一种快速检测痕量 Ｈ５亚型禽流感病毒的间接免疫 ＰＣＲ方法和间接“三明治”抗体夹心免疫 ＰＣＲ方 法。以ＴｏＹｉｅｌｄ９６孔板为固相免疫吸附载体，以禽流感病毒 Ｈ５蛋白为检测对象，通过一系列免疫反应及亲和素 ｐ 生物素桥联作用，将生物素标记的报告 ＤＮＡ分子和生物素标记的禽流感病毒 Ｈ５亚型抗体分子连接。充分洗涤 后，在 ＴｏＹｉｅｌｄ板孔中添加 ＰＣＲ反应液，对板壁偶联的报告 ＤＮＡ进行 ＰＣＲ扩增，间接达到检测微量禽流感病毒 ｐ 蛋白的目标。通过优化报告 分子和链亲和素的浓度，种免疫 技术都可检测到约 的禽流感病 Ｈ５ ＤＮＡ ２ ＰＣＲ １ｆ ｇ 毒 Ｈ５蛋白，与常规 ＥＬＩＳＡ方法相比，灵敏性提高了近 １０００倍。 关键词：免疫 ；禽流感病毒； 血凝素蛋白 ＰＣＲ Ｈ５ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５４．４３ Ａ ０３６６６９６４２０１１０７１０３９０７ 　　　　 　　　　 犐犿犿狌狀狅犘犆犚犃狊狊犪 犳狅狉犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犎５犎犲犿犪 犾狌狋犻狀犻狀犛狌犫狋 犲犃狏犻犪狀 狔 犵犵 狔狆 犐狀犳犾狌犲狀狕犪犞犻狉狌狊 ， ， １２ １２ ２ ， ， ， ＤＥＮＧＭｉｎｕｎ ＸＩＡＯＸｉｚｈｉ ＷＵＺｈｅｎｘｉｎ ｇｊ ｇ １ ２ ２ ， ， ， ＺＨＡＮＧＹａｎｍｉｎ ＸＩＮＸｕｅｉａｎ ＺＨＥＮＧＸｉａｏｌｏｎ