海刺参i型溶菌酶基因的重组表达及抑菌谱分析.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, February 25; 25(2): 189-194 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 海洋生物技术 海刺参i 型溶菌酶基因的重组表达及抑菌谱分析 王秀霞, 丛丽娜, 王丹, 杨西建, 朱蓓薇 大连工业大学生物与食品工程学院, 大连 116034 摘 要: 将本实验室已分离到的海刺参 (Stichopus japonicus) i 型溶菌酶的基因(GenBank Accession No. EF036468)亚克 隆进原核表达载体pET32a(+) 中, 构建重组质粒 pET32a(+)-SjLys, 转化至大肠杆菌 BL21(DE3)pLysS 。阳性克隆子经诱 导表达、亲和纯化和透析复性, 得到了酶活力为 19.2 U/mg 的重组SjLys (rSjLys), 并对rSjLys 进行了抑菌谱测定。结果 表明, rSjLys 对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用, 尤其对常见的海洋致病菌副溶血弧菌和铜绿假单胞菌具有很强的 抑菌活性。更为显著的结果是, rSjLys 经 100oC 、40 min 加热处理后, 失活的rSjLys 对革兰氏阳性菌和阴性菌的抑菌能 力高于rSjLys 的9%~25% 。上述结果表明, 海刺参溶菌酶是一种具有糖苷酶活性和非酶抑菌活性的特殊的i 型溶菌酶, 且 具有很广的抑菌活性, 在海刺参机体先天免疫系统中是一个重要的效应分子。 关键词: 海刺参, 溶菌酶, 重组表达, 抗菌活性 Recombinant expression and antibacterial activity of i-type lysozyme from sea cucumber Stichopus japonicus Xiuxia Wang, Lina Cong, Dan Wang, Xijian Yang, and Beiwei Zhu School of Biology and Food Engineering, Dalian Polytechnic University, Dalian 116034, China Abstract: The cDNA of an i type lysozyme was cloned from Stichopus japonicus (named as SjLys). The DNA fragment of the mature SjLys was subcloned into expression vector of pET-32a (+) to construct the recombinant plasmid of pET32a (+)-SjLys. The recombinant plasmid was then transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS and induced by isopropylthio-β-D-g