猪CD4基因编码区及其剪接体克隆与表达分析CodingSequence.PDFVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2016, 24(7): 1047~1053 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2016.07.012 猪CD4基因编码区及其剪接体克隆与表达分析 1,2 2 1 1 1* 2,3* 许金根 张勤 王立克 任曼 李升和 王重龙 1 安徽科技学院动物科学学院，凤阳233100 ；2 中国农业大学动物科技学院，北京 100193；3 安徽省农业科学院 畜牧兽医研究所，合肥 230031 *通讯作者，lishhe2005@163.com，ahwchl@163.com 摘 要 白细胞分化抗原4(cluster of differentiation 4, CD4)是一种主要表达在CD4+细胞膜上的共受体 和信号转导分子。CD4 分子参与识别主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC) Ⅱ 类分子，在T 淋巴细胞亚群的发育、分化以及CD4+细胞抗原识别过程中发挥重要功能。本研究旨在克隆 猪(Susscrofa)CD4基因及其剪接体编码区(coding sequence, CDS)，并揭示CD4mRNA 在猪组织中的表达 特征。根据猪CD4 mRNA 序列(GenBank 登录号: AY515292) ，利用反转录PCR (reverse transcription- PCR, RT-PCR)扩增大白猪CD4基因的编码区，并分析CD4基因选择性剪接在不同组织中的表达情况。 同时，用荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)分析CD4mRNA 在大白猪不同组织中的表 达谱，以及在大白猪、长白猪和松辽黑猪3 个免疫组织中的表达量。结果显示，通过RT-PCR 、克隆和测 序，获得两种猪CD4编码序列(GenBank 登录号: KC333253 和KC333254) ，其中完整型(1 375 bp)和剪接型 (1 252 bp) CD4分别编码457 和397 个氨基酸；两种CD4编码序列在猪外周血、胸腺、淋巴结和脾脏中均有 表达，其中完整型CD4的表达量要高于剪接型。qRT-PCR 结果表明，猪CD4基因在脾脏中的表达量显著 高于肝脏、胃、肾脏、心脏和肌肉(P＜0.05) ；同一免疫组织的CD4mRNA 含量在大白猪、长白猪和松辽黑 猪之间没有显著差异(P＞0.05) ，而3 个猪种都是胸腺中的CD4基因表达量显著高于在脾脏和淋巴结中 (P＜0.05) 。本研究为进一步探究猪CD4基因的结构和功能提供基础资料。 关键词 猪，白细胞分化抗原4(CD4) ，基因克隆，选择性剪接，组织表达 中图分类号 S828 文献标识码 A Coding Sequence Cloning, Alternative Splicing and Expression Analysis of the CD4 Gene in Pigs (Susscrofa) XU Jin-Gen1,2 ZHANG Qin2 WANG Li-Ke1 REN Man1 LI Sheng-He1* WANG Chong-Long2,3* 1 College of Animal Science, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China; 2 College of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100193, China; 3 Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Anhui Academy of Agricultural Sciences, Hefei 230031, China * Corresponding authors, li