10章核酸的合成-1.ppt

* * 碱基丢失 结构缺陷 3、重组修复（recombination repair） 又称复制后修复（postreplication repair） 受损伤的DNA在进行复制时，跳过损伤部位，在子代DNA链与损伤相对应部位出现缺口。通过分子间重组，从完整的母链上将相应的碱基顺序片段移至子链的缺口处，然后再用合成的多核苷酸来补上母链的空缺，此过程即重组修复。 并非完全校正。 重组修复 4.错配修复 对于复制过程中出现的错误，机体内本身就存在有校正机制。这种校正机制通常可以由DNA聚合酶3’→5’的校对功能立即进行纠正。如果DNA聚合酶没有发现错配，就需要错配修复（mismatch??repair, ?MMR）系统来完成。 谁错了？ 在大肠杆菌中的错配修复系统已经研究得十分透彻了。这个系统主要包括错配矫正酶（mismatch??correction??enzyme）、DNA聚合酶Ⅲ和DNA连接酶等11种蛋白参与。 可以分为步骤：启始、切除和修复。 错配修复 六、 复制体 精确性 DNA重组与克隆 ①从细胞中分离出DNA ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ②限制酶截取DNA片断 ③分离大肠杆菌中的质粒 ④ DNA重组 ⑤用重组质粒转化大肠杆菌 ⑥培养大肠杆菌克隆大量基因 ⑦重组体的筛选 克隆羊多利的诞生 胚胎羊 乳腺上皮细胞（提供DNA） 母羊 除去细胞核的卵母细胞（受体） 体外融合 植入受体母羊 * * * * * * * * * * * * * * * 当新形成的冈崎片段延长至一定长度，其3’-OH端遇到上一个冈崎片段时即停止合成。 前导链合成随复制叉移动到起始点即停止复制（大肠杆菌只有一个起始点）。 5、复制终止－－切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 复制终止 这时会发生一系列变化：在DNA聚合酶Ⅰ催化下切除RNA引物；留下的空隙由DNA聚合酶Ⅰ催化合成一段DNA填补上； 在DNA连接酶作用下，连接相邻的DNA链；修复掺入DNA链的错配碱基。这样以两条亲代DNA链为模板，各自形成一条新的DNA互补链。 结果是形成了两个DNA双股螺旋分子。 （二）真核生物中DNA的复制 与原核生物极为相似 1、真核生物中DNA的复制特点 (1)真核生物染色体有多个复制起点，多复制眼，呈双向复制，多复制子。 (2)冈崎片段长约100－200bp. (3)真核生物DNA复制速度比原核快。 多个复制起点 多复制子 (4)真核生物染色体在全部复制完之前起点不再重新开始复制； (5)真核生物有多种DNA聚合酶。 (6)真核生物线性染色体两端有端粒结构，防止染色体间的末端连接。由端粒酶负责新合成链5?RNA引物切除后的填补，亦保持端粒的一定长度。 replication origin (~300 bp) replication protein A 2、复制起始 复制起点 夹子 夹子 3、 端粒酶负责 4、 （三） 1. 半保留复制； 2. 有一套完整的复制酶系统； 3. 有特定的复制起始点； 4. 复制叉的延伸方向（一起点双向复制）； 5. 生长链的延伸方向（ 5’→3’）； 6. 半不连续复制； 7 DNA 复制的忠实性 （四） 定义:以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA称为逆转录，由逆转录酶催化进行。 四、逆转录 Reverse transcription of DNA 1 1970年Temin和Baltimore同时分别从劳氏肉瘤病毒和小白鼠白血病病毒等致病RNA病毒中分离出逆转录酶，迄今已知的致癌RNA病毒都含有逆转录酶。 用特异抑制物（放线菌素D）能抑制致癌RNA病毒的复制，而对一般RNA病毒的复制无影响。 已知放线菌素D专门抑制以DNA为模板的反应，可见致癌RNA病毒的复制过程必然涉及到DNA。 所以Temin提出前病毒的假说。 + RNA+ DNA- RNA+ DNA- DNA+ 病毒RNA的逆转录过程 （以前病毒形式引起整合到宿主细胞DNA中而使细胞恶性转化） 单链病毒RNA RNA-DNA杂交分子 双链DNA（前病毒） 逆转录酶 逆转录酶 逆转录酶也和DNA聚合酶一样，沿5’?3’方向合成DNA，并要求短链RNA作引物。 2 逆转录酶是多功能酶，兼有多种酶的活性： RNA指导的DNA聚合酶活性 DNA指导的DNA聚合酶活性 核糖核酸酶H的活性，专一水解RNA-DNA杂交 分子中的RNA DNA连接酶，解旋酶的活性 逆转录酶发现的理论和实践意义： 不能把“中心法则”绝对化，遗传信息也可以从RNA传递到DNA。促进了分