枯草芽孢杆菌6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的纯化及部分性质分析研究.pdfVIP

枯草芽孢杆菌6．磷酸葡萄糖酸脱氢酶的纯化及部分性质 生物化学及分子生物学专业 研究生秦岭 指导教师刘克武 摘要 在对枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 (6一phosphogluconate 的基础上，对其性质进行了初步的研究。将枯草芽孢杆菌超声波破壁后的粗提 CL一6B G-200凝胶过滤等纯化步骤，得到聚雨烯酰胺凝胶 特异结合柱层析和Sephadex 电泳为单一蛋白区带，比活为I．46 S-300柱(AKTA U／mg的酶制剂。用Sephacryl FPLC系统)测得全酶相对分子质量为110000Da，用$DS一聚丙烯酰胺凝胶测得电 泳驱基相对分子质量为51000Da。因此，枯草杆菌6一磷酸葡萄糖酸脱氢酶具有 两个相同分子量的亚基。动力学研究表明亚基之间没有协同效应。等电聚焦显 示其等电点(pI)为5．2。氨基酸组成分析表明：枯草芽孢杆菌6一磷酸葡萄糖 酸脱氢酶的亚基由约480个氨基酸残基组成，富含丙氨酸、门冬氨酸、亮氨酸、 丝氨酸、谷氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸。圆二色谱(cD)对其二级结构 的分析显示，该酶分子中a一螺旋占43．7％。B一折叠占26．9％，无规则卷曲占 29．4％。 通过动力学方法测得该酶最适pH为8．0，最适温度为30。C，并对热不稳定。 mol／L p 和Kin2(6-GPA)=22．6 Ca”、Mn”对酶有不同程度的激活作用，其中Mg的激活作用最强；Fe”、Cu2+对酶 丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团。 动力学研究表明。NADP+是该酶的唯一辅酶。两种底物与酶的结合互不影 响，而在产物抑制效果上，5．磷酸核酮糖只竞争性抑制6．磷酸葡萄糖酸，NADPH 关键词：枯草芽孢杆菌；6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶；分离纯化：性质 AND PRoPERTIES0F ISOLATIoNSoME and Major：BiochemistryMicrobiology Graduate Instructor：LiuKewu student：QmLing 1．1．1．44)WaS dehydrogemBe(6-PGADase，EC Abstract：6-Phosphogluconate isolated sulfate byhomogcnate，ammunium and with Affmity filtration gel chromatography,Blue-sepharosechromatography frombacillus some ofthe had G-200 subtills，and b6en Sephadex