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普萘洛尔对映体葡醛酸化立体选择性代谢研究 浙江大学药学院药物分析专业 99级硕士研究生 马剑茵 导师 栾连军副教授 邵青 副教授 摘要： 目前，临床应用的许多药物都具有光学活性，其中相当部分以外消旋体方式 给药。体内大分子如酶、受体、血浆蛋白等都具有手性特征，手性对映体药物在 吸收、分布、代谢与排泄过程中，通过与体内大分子的不同立体结合，导致了对 映体间可能具有不同的药理作用和不良反应。因此，建立手性药物及其代谢产物 的分离分析方法，对于手性药物的药动学、药效学和毒理学研究具有重要意义。 剂，有R一(+)和S一(一)型两种光学异构体。本文建立了普萘洛尔光学异构体葡 醛酸化代谢物高效液相色谱测定方法，采用体外方法，研究了经苯巴比妥诱导的 鼠肝微粒体酶动力学特性及催化立体选择性，同时测定了健康志愿者尿样中的普 萘洛尔对映体葡醛酸化代谢物的排泄分布，探索普萘洛尔对映体人体内代谢的立 体选择性。 1、苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体酶对普萘洛尔葡醛酸化立体选择性代谢的影响 普萘洛尔为一种非选择性B一受体阻断剂，临床上常以外消旋体给药。本文采 用反相高效液相色谱法，测定大鼠肝微粒体孵育液中营萘洛尔对映体葡醛酸化产 物，研究了其代谢的立体选择性。 uin)；流动相：67mm01．一 色谱条件：色谱柱：ALLTI姒C。。250n_lrn×4．6tumiD(5 速：l_Oml．min～：进样量：20pl。 测定方法：大鼠肝微粒体孵育液体积0．5mi，加入R／S一普萘洛尔，37℃水浴预孵 育5min，然后加入适量UDPGA(3mmol／L)启动反应，恒温振摇孵育一定时间， mol／L 加入内标液(对硝基苯甲酸)，同时加2mol／L三氯醋酸适量终止反应，用2 结果：R／S-普萘洛尔葡醛酸苷分离良好，孵育液杂质不干扰R／S一普萘洛尔葡醛酸 u r=0．9998。线性范围0．2439～73．17mol／L，平均回收率为99．40±1．04％，日内精 密度RSD小于3．32％，日间精密度RSD小于4．52％。 与空白组相比，PB诱导微粒体酶动力学参数发生明显变化：以R一(+)一PROP 为底物时，V。。Cl，。显著增大，分别为空白组的4．3、9．8倍，K。为空白组的0．4 倍，显著减小，表明PB诱导后，酶对R一(+)一PROP的亲和力、催化能力显著增 强：以S一(一)一PROP为底物时，V。。Cl㈣显著增大，分别为空白组的10．6、6．9 倍，K。为空白组的1．5倍，表明PB诱导后，酶对S一(一)一PROP的催化能力显著 增强，但亲和力降低。另外，普萘洛尔对映体之间对代谢有相互抑制作用，浓度 越高抑制越明显。 2、普萘洛尔对映体人体内代谢的立体选择性研究 建立了人尿中普萘洛尔对映体葡醛酸化代谢产物的反相高效液相色谱测定方 法，并研究了体内代谢立体选择性。目前，普萘洛尔对映体在人体内葡醛酸化的 立体选择性研究尚未见报道。 色谱条件：色谱柱：钻石C．。色谱柱(迪马公司)250mm×4．6tumiD(5um)：流动相： u 进样量：201。荧光检测器，Ex：310nm，Em：339nm。 u 测定方法：取受试者尿样lml，离心，取上清液20l作HPLC分析。 结果：尿样中的R一(+)普萘洛尔葡醛酸苷与S一(一)普萘洛尔葡醛酸苷分离良好， min和18．4 且空白尿液无干扰，保留时间分别为14．4 min。以R一(+)普萘洛尔 葡醛酸苷的峰面积(A)与浓度(C)进行线性回归，得线性方程为： umol／L。平均回 定量限为0．02320u