培养基优化方法的研究.pptVIP

利用稻草液体发酵产纤维素酶优化培养基 纤维素酶简介 1　 材料和方法 1、1　 菌种 里氏木霉 (Trichoderma reesei) 1、2　 培养基 1、2、1　 斜面培养基 　PDA培养基. 1、2、2　 一级种摇瓶培养基 　 麸皮0.02g/mL,葡萄糖0.03g/mL, (NH4)2SO40.0015g/mL, pH 5.5-6.0 1、2、3　 二级产酶摇瓶基础培养基 　 稻草粉 ,豆粕粉 ,无机盐等 , pH5.5-6.0 1　 材料和方法 1.3　 主要仪器设备 722S分光光度计;电热恒温水浴锅; 台式冷冻离心机; 全温摇瓶柜. 1.4　 酶活性测定方法 1.4.1　 羧甲基纤维素酶与滤纸糖酶活性 ( FPA)活性 (CMCp ase)测定 　 DNS法 ： 2　 结果与讨论 2 . 1　 二级产酶培养基稻草粉与豆粕粉的用量对纤维素酶活性的影响表 1　 二级产酶培养基稻草粉与豆粕粉用量对纤维素酶活性的影响 2.2 一级种接种量等对纤维素酶活性影响的正交试验   2 . 1　 实验因素水平安排 　 表 2　 一级种接种量等正交试验因子及水平安排表 表 3　 一级种接种量等因子摇瓶正交试验 CMC酶活性结果分析 表 4　 一级种接种量等因子摇瓶正交试验 FPA酶活性结果分析 　 　 从表 3看 ,一级种接种量等因子对 CMCp ase的影响 ,通过极差分析其顺序为 D B A C,最佳配方为D1B3 A2 C1 ;方差分析的显著性顺序与极差分析一致.从表 4看 ,一级种接种量等因子对 FPA酶活性的影响,极差分析与方差分析的顺序均为 D B C A,最佳配方则为D1B3 A2 C1. 产纤维素酶最佳组合:一级种接种体积分数为 15% ,二级产酶发酵时间 168 h,一级种培养时间 24 h,通气装瓶量 50 mL.对比 9号实验数据 ,两者结果基本吻合; CMCp ase酶活性最高平均为 85 . 56 U /mL; FPA酶活性最高平均为 11 . 78 U /mL. 2 . 3　 无机盐等因素对纤维素酶活性影响的正交试验 2 . 3 . 1　 实验因素水平安排 　表 5　 无机盐等正交试验因子及水平安排表 2 . 3 . 2　 实验结果及分析 表 6　 无机盐等因子摇瓶正交试验 CMC酶活性结果分析 表 7　 无机盐等因子摇瓶正交试验 FPA酶活性结果分析 从表 6看 ,无机盐等因子对 CMCp ase的影响 ,通过极差分析其影响顺序为 C B A D,最佳配方为C3B3A1D1 ;方差分析的显著性顺序与极差分析一致. 从表 7看 ,无机盐等因子对 FPA酶活性的影响 ,极差分析与方差分析的影响顺序则为 B C A D,最佳配方为 B3C3A1D1. 产纤维素酶最佳组合为: KH2PO4 0.01g/mL, CaCl2 0 .006 g/mL,二级产酶发酵时间 120 h,聚醚不加. 3　 结论 (1) 采用摇瓶平行试验与正交试验相结合研究培养基的优化组成问题 ,对于以后利用里氏木霉 HC2 415菌在发酵罐中进行稻草液体深层发酵生产纤维素酶的工业化试验具有重要的指导意义.优化后的培养基组合能明显提高纤维素酶的活性并缩短发酵时间. (2) 底物浓度及 C /N对纤维素酶的产生有较大的影响[ 7 ].由 2 . 1实验结果 ,可知里氏木霉 HC2 415菌对稻草培养基固形物的浓度要求为 0 . 05～0 . 07 g/mL.超过 0 . 09 g/mL时 ,酶活性显著降低.产酶培养基中稻草粉与豆粕粉最佳用量比例为 4∶ 1～6∶ 1 . (3) 综合 2 . 2及 2 . 3实验结果 ,可知里氏木霉 HC2 415菌利用稻草液体发酵产纤维素酶时 ,培养基的通气量、 无机盐 KH2 PO4、 CaCl 2和二级产酶发酵时间对纤维素酶的生成具有显著性的影响.优化后的稻草培养基最佳产酶时间能缩短 2 d . (4) 表面活性剂聚醚在本实验中对里氏木霉 HC2 415菌利用稻草液体发酵产纤维素酶的影响不显著,其机理有待进一步的深入研究. 参考文献: [ 1 ]　WOOD TM, MCCRAE S l . Sinergis m bet ween enzymes involvement in the s olubilizati on of native cellul ose[ J ]. Adv Chem Ser,1979, 18 (1) : 1812 209 . [ 2