西部散养肉牛病毒性腹泻病毒流行及遗传变异-中国农业科学.pdf

中国农业科学 2016,49(13):2634-2641 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.13.019 西部散养肉牛病毒性腹泻病毒流行及遗传变异 陈 锐，范学政，朱元源，邹兴启，徐 璐，张乾义，王 琴，赵启祖 （中国兽医药品监察所，北京100081） 摘要：【目的】牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）是一种可导致养牛业出现重大经 济损失的常见病原体。该文以中国西部散养肉牛为研究对象，拟通过血清学方法和生物信息分析，评估BVDV在中 国散养肉牛中的整体流行状况，探究国内流行的 BVDV 基因多样性，为制定针对 BVDV 的合理防控措施和疫苗的研 发提供理论依据与素材。【方法】2014—2015 年分别从云南、新疆、甘肃和内蒙古 4 省（区）采集散养肉牛的血 清样本共 1 332 份，利用 BVDV 抗体检测试剂盒进行检测，统计不同地区散养肉牛 BVDV 抗体阳性率。将抗体阴性 的血清样本进行BVDV抗原检测，抗原阳性或可疑血清接种MDBK细胞，连续盲传五代分离病毒。根据BVDV 5-UTR 保守序列设计引物，经 RT-PCR 扩增 5-UTR 序列并测序。利用 Sequencher4.2、BLAST、ClustalX、MEGA5.2 等软 件对序列进行生物信息学分析，绘制流行毒株系统进化树，确定分离毒株的基因型。【结果】4省（区）散养肉牛 BVDV整体抗体阳性率为33.93%。血清抗体阳性率从高到低依次为内蒙71.43%，新疆57.69%，甘肃第16.54%，云 南 10.0%。BVDV 抗原整体阳性率为 1.58%，新疆抗原阳性率最高。研究共分离 13 株 BVDV 流行毒株，分别命名为 甘肃 120、内蒙 1369、伊犁霍清 12953、伊犁霍清 12960、伊犁霍清 12981、博州精河 13001、博州精河 13023、 博州精河13033、新疆奇台13041、新疆奇台13042、新疆奇台13191、新疆奇台13220、新疆奇台13251。进化树 分析显示新疆地区散养肉牛中流行的主要是BVDV-1q和BVDV-1f，内蒙地区流行的主要是BVDV-1m，甘肃地区流行 的是一种新的基因亚型BVDV-1u。【结论】通过血清学方法检测发现，虽然4个省（市、自治区）散养肉牛整体抗 体阳性率低于国内平均水平，但情况却不尽相同。内蒙古和新疆抗体高阳性率表明BVDV 在这些地区散养肉牛中已 经广泛流行，必须采取适当措施将其危害性降到最低。从基于5-UTR 序列绘制的系统进化树可以看出，不同地区 散养肉牛感染的 BVDV 基因亚型有所不同。总体看来，BVDV 在散养肉牛中的分布呈现多样性，跨物种、跨地域传 播和高突变性等特点，这些都使疫苗免疫策略面临严峻的挑战。研究通过对各地区散养肉牛的随机大量采样、检 测和分析，客观评价BVDV在散养肉牛中的流行情况，为更好的制定预防策略提供参考依据。 关键词：BVDV；散养肉牛；ELISA；阳性率；基因分型 Prevalence Study and Phylogenetic Analysis of Bovine Viral Diarrhea Virus in Free-Roaming Beef Cattle in Western China CHEN Rui, FAN Xue-zheng, ZHU Yuan-yuan, ZOU Xing-qi, XU Lu, ZHANG Qian-yi, WANG Qin, ZHAO Qi-zu (China Institute of Veterinary Drugs Control, Beijing 100081 ) Abstract: 【Objective 】Bovine viral diarrhea virus(BVDV) is commonly recognized as an